中文摘要：

在已经完成肝靶向丹参酮ⅡA聚乳酸纳米粒制备及其抗肝癌研究的基础上。采用基因克隆技术，构建pGL4- luc-neo-FN质粒，并利用纳米靶向技术制备丹参酮ⅡA纳米粒基因递送系统，利用FN分子和肝癌细胞表面的integrinα5β1受体的亲和力，特异性地阻断肝癌细胞表面integrin受体的表达并抑制其活性，提高丹参酮ⅡA在细胞内穿透性以及由于刺激受体产生的细胞内吞作用，增强丹参酮ⅡA纳米的靶向性。并建立裸鼠人肝癌模型，研究丹参酮聚乳酸FN/integrinα5β1纳米粒的靶向性和对裸鼠人肝癌侵袭转移的治疗作用，同时利用Q-RT-PCR和Western Blotting 技术观察丹参酮ⅡA聚乳酸FN/integrinα5β1纳米粒对裸鼠肝癌ECM、FAK、PDGF的表达影响。揭示丹参酮ⅡA聚乳酸纳米粒基因递送系统抗肝癌侵袭转移的机制，为肝细胞癌的靶向治疗提供新的方法和理论依据。

结论摘要：

目 的: 探讨丹参酮IIA多级靶向纳米粒的制备工艺及其治疗裸鼠肝癌的作用。方 法: 采用乳化溶剂蒸发法制备丹参酮IIA多级纳米粒；扫描电镜照片评价纳米微粒表面结构；光学显微镜观察纳米粒的粒径分布；检测丹参酮IIA多级靶向纳米粒的包封率、载药量等，并观察体外药物释放规律。CCK-8法观察细胞毒性，以及对人原位肝癌裸鼠动物模型的生长抑制作用。比较治疗后各组裸鼠的肿瘤生长情况、生存时间。WB检测其intergrinβ1、 FAK及p-FAK蛋白表达水平。结 果: 丹参酮IIA多级靶向纳米粒大小均匀，外形圆整，平均粒径为190nm，Zeta电位为4.3mv，包封率和载药量分别为94.12±5.2 %、2.05 ± 0.12 %。制成纳米制剂后与游离的丹参酮IIA单体相比释放速度明显减慢，丹参酮IIA多级靶向纳米粒在在120小时累积释放量为72.59 %。CCK-8比色法观察人肝癌细胞生存率，与丹参酮IIA相比，丹参酮IIA多级靶向纳米粒的细胞毒性明显增加。治疗后与等剂量丹参酮IIA相比，丹参酮IIA多级靶向纳米粒组瘤体体积、重量和肿瘤生长率明显低于其它各组（P<0.01)；生存期明显长于其他各组（P<0.01)。丹参酮ⅡA纳米基因递药系统能够下调integrinβ1、FAK、p-FAK蛋白表达水平。结 论: 本研究采用乳化蒸发法建立了RGD修饰的丹参酮IIA多级靶向纳米粒制备方法。与丹参酮IIA相比，丹参酮IIA多级靶向纳米粒随着时间的延长能够将药物逐步释放出来，具有良好的缓释特征和肿瘤靶向作用。丹参酮IIA多级靶向纳米粒能有效提高丹参酮IIA的细胞毒性，对裸鼠肝癌具有较好的治疗作用，并能明显延长荷瘤裸鼠的生存期。其抗肝癌的作用机制可能与抑制intergrinβ1及FAK的磷酸化有关。