中文摘要：

OPTN基因E50K突变可以引起RGCs的凋亡，但具体机制不清。已知BDNF运输障碍在RGCs凋亡中起重要作用，OPTN编码的蛋白Optineurin可以与特异调控BDNF囊泡运输的Htt蛋白共域结合，因此我们拟在已建立的体外OPTN基因E50K突变转基因细胞模型上，检测OPTN与Htt表达及蛋白结合情况；外源给予BDNF，检测BDNF与Optineurin、Htt蛋白分布、共存情况及RGCs凋亡；并在构建的视网膜组织特异性人OPTN（E50K）突变转基因小鼠模型上，进一步从体内研究OPTN基因E50K突变对Htt调控BDNF转运的影响以及导致RGCs凋亡的机制，研究结果将揭示OPTN基因突变致POAG发病的机制，为青光眼的基因治疗提供科学依据，并对推进该疾病的研究具有重要意义。

结论摘要：

本课题研究OPTN（E50K）突变对Optineurin-Htt运输BDNF的影响在OPTN（E50K）突变致RGCs凋亡中的作用机制，OPTN基因是POAG的致病基因，OPTN基因E50K突变可以引起RGC的凋亡和BDNF的表达及运输障碍。通过建立真核表达载体pcDNA3.0-his-OPTNWT与pcDNA3.0-his-OPTNE50K并瞬时转染到RGC细胞，应用Western Blot检测BDNF表达水平；在已建立的人视网膜OPTN（E50K）转基因小鼠动物模型上，利用Western Blot检测转基因小鼠视网膜BDNF表达水平，并应用细胞及组织免疫荧光技术检测各种蛋白在细胞内的定位及表达情况，应用免疫共沉淀技术检测OPTN与HTT蛋白的相互作用。结果显示在体内及体外模型中，均可见OPTN（E50K）突变模型中BDNF水平较野生型及正常对照组表达量低，在形态学验证中得到相似的结果，OPTN转基因模型中，optineurin与huntingtin蛋白运输能力降低，使BDNF含量减少，降低对RGC调亡的修复能力，导致青光眼的发生，从而阐明OPTN（E50K）突变导致RGCs凋亡的机制以及其在青光眼发病过程中致病机理，为寻找新的基因治疗靶点和基因治疗策略提供科学依据。