卵巢癌是女性生殖器官致死率最高的恶性肿瘤,侵袭和转移是卵巢癌预后差和治疗困难的最主要因素。最新的研究表明miR-200家族成员参与调节ZEB的信号网络体系,促使细胞上皮到间质转型(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT),形成恶性肿瘤的扩散和转移。我们在前期研究中发现miR-200家族成员在卵巢癌中过表达,通过转染miRNA mimic提高细胞内的miR-200家族成员表达水平,能有效地抑制卵巢癌细胞上皮向间质的转型,抑制肿瘤的侵袭和转移。本研究通过卵巢癌标本验证miR-200c/141和ZEB在卵巢癌不同分期的表达及变化规律,利用分子细胞遗传学和生物信息学手段研究卵巢癌中miR-200c/141与ZEB的相互调控机制,研究其对EMT或MET的调节过程,阐明其对卵巢癌细胞的侵袭和转移能力的影响,为指导今后临床防治卵巢癌转移具有实际应用价值和意义。
ovarian cancer;miRNA-200c;ZEB;EMT;metastasis
采用生物信息学分析预测miR-200c/141的靶基因,且进行GO及Pathway分析。miR-200c/141的预测靶基因分别为186个和117个。GO分析显示miRNA-200c 调控的靶基因集合功能富集在蛋白连接,转录因子活性等生物学过程;miRNA-141富集于转录因子活性,DNA连接等生物学过程。Pathway分析显示miR-200c富集于Epstein-Barr 病毒,粘附等信号通路;miR-141 富集于Wnt信号转导通路,昼夜节律等。依据生物信息学分析发现ZEB2是miR-200c/141的预测靶位点,GO分析显示ZEB2基因参与蛋白连接,磷酸酶调节活性等生物学过程。通过Real-time PCR的方法检测48例卵巢癌及30例正常卵巢组织miR-200c的表达水平。结果发现在卵巢癌发生发展过程中存在着miR-200c表达的动态变化,miR-200c的表达与卵巢癌临床分期及淋巴结转移密切相关。构建野生型、突变型的ZEB2 3'UTR荧光素酶报告基因表达载体,转染卵巢癌细胞,鉴定靶向miRNAs对ZEB基因的调控作用,同时观察其对卵巢癌细胞侵袭及转移能力的影响。结果发现ZEB2是miR-200c的预测靶位点,且上调miR-200c表达后,ZEB2蛋白表达明显下降。ZEB2 siRNA下调ZEB2蛋白的表达水平,显著降低细胞的侵袭能力。转染miR-200c 能上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达,miR-200c 参与卵巢癌的EMT过程。 本研究小组扩展了研究内容, XIAP是miR-200c的预测靶基因,采用siRNA沉默SKOV-3细胞XIAP基因的表达,结果发现沉默XIAP基因可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导凋亡。同时通过siRNA沉默HER-2的表达,检测了细胞生物学的变化及细胞上皮标志物的变化,结果显示HER-2下调后,能抑制细胞的凋亡及侵袭能力,说明EMT参与了HER-2 siRNA介导的卵巢癌侵袭与转移过程。采用lncRNA基因芯片技术检测正常卵巢及卵巢癌中lncRNA表达谱的差异,筛选出差异表达的lncRNA, 探讨lncRNA在卵巢癌发生发展中的作用。今后在此研究基础上,将进一步探讨miRNA与lncRNA之间的调控机制,为卵巢癌的治疗开辟新的思路。