本研究首先利用原核表达系统,表达出VSV G蛋白的57kDa蛋白片段,并对其进行纯化。同时,以犊牛口腔黏膜上皮为材料,建立了一种原代犊牛口腔黏膜上皮细胞培养方法,并将VSV接种于犊牛口腔黏膜上皮细胞(CPMBCs),初步明确VSV对该细胞的侵袭过程;利用噬菌体表面展示技术,构建了对VSV具有高反应性的CPMBCs高质量cDNA展示文库。在此基础上,用纯化的VSV G蛋白与构建的T7 噬菌体展示文库进行文库筛选,获得一个VSV可能的受体蛋白基因功能区片段。该基因片段长度为801bp,含有一大小为375bp的开放阅读框,编码124个氨基酸残基,将其命名为CPMBCsCP1。同源性分析结果证明,该结合蛋白与人类的剪接因子3b的同源性较高;通过扩增VSV-G蛋白基因,构建酵母双杂交诱饵质粒,并对其在酵母双杂交系统中的可行性进行检测,结果表明该诱饵质粒可为进一步从VSV敏感细胞cDNA文库中钓取VSV受体奠定了基础。以上研究结果为VSV致病机制的研究奠定了基础。
英文主题词Vesicular stomatitis virus, G protein,T7 phage display library, bait plasmid,receptor