中文摘要：

Th17细胞介导的黏膜免疫在宿主抗念珠菌感染中起重要作用，而雌激素可抑制黏膜免疫及促进念珠菌感染。鉴于RORγt是Th17细胞分化的最重要转录因子，雌激素可能对阴道粘膜Th17细胞RORγt进行调控，进而导致念珠菌性阴道炎的发生。本课题拟通过分离及培养RORγt-eGFP转基因小鼠阴道黏膜Th17细胞和构建雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型，采用siRNA干扰、CHIP-on-chip、Western blot、Real-time PCR、ELISA、流式细胞术、激光共焦显微镜检查等方法，在基因转录、蛋白表达水平上研究雌激素调控阴道粘膜Th17细胞RORγt的信号转导通路，探讨雌激素通过RORγt来调节Th17细胞及其细胞因子的抗真菌感染作用。研究结果不仅有助于阐明念珠菌性阴道炎发病机制和提供新治疗靶点，而且为其它黏膜感染性疾病的研究奠定理论基础。

结论摘要：

应用小鼠脾细胞进行体外分化诱导，发现雌二醇通过下调Rorγt表达抑制Th17细胞分化。雌二醇激活雌激素受体α（ERα）募集雌激素受体活性阻遏物（REA），形成ERα/REA复合物，再通过与Rorγt启动子区3个雌激素反应元件（ERE）半位点结合来抑制Rorγt表达。siRNA敲减Rea表达可促进Rorγt表达及Th17细胞分化。组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275以时间和剂量依赖方式增加Rorγt表达及Th17细胞分化。这些结果显示雌二醇通过ERα募集REA结合到RorγT启动子区ERE，从而抑制RORγT表达和Th17细胞分化。我们用皮下注射雌二醇方法建立了BALB/c小鼠念珠菌性阴道炎模型，发现雌二醇处理增加阴道载菌量及感染和炎症程度。菌落计数在接种后3 d达高峰，7 d后明显下降；感染积分在7 d内逐渐增加，14 d减少；炎症程度在14 d内进行性加重。结果显示改良组织学评分方法比菌落计数更适用于评价念珠菌性阴道炎模型的感染严重性和动态变化。在小鼠念珠菌性阴道炎模型中，RT- PCR、免疫荧光和Western blot检测显示阴道黏膜RORγt、RORα、IL-17表达一般在接种后3 d出现，14 d达高峰，感染组表达明显高于非感染组。IL-23高表达仅见于感染组。结果提示阴道念珠菌感染促进RORγt、RORα、IL-17、IL-23表达，Th17细胞和 IL-23在小鼠念珠菌性阴道炎发病机制中作用。 301例疑似念珠菌性阴道炎患者标本共分离出念珠菌186株，发现白念珠菌170株（91.4%），光滑念珠菌8株（4.3%），热带念珠菌6株（3.2%），近平滑念珠菌2株（1.1%）。白念珠菌对卡泊芬净、伏立康唑、氟康唑较敏感。我们从1例无明显症状女性阴道内2次分离出阿萨希毛孢子菌，分离菌株用3个基因序列分析鉴定，随机扩增DNA多态性（RAPD）显示2次分离菌株为同一菌种。这是国内首次报道阴道中阿萨希毛孢子菌持久定植。总之，我们首次提出了雌二醇抑制Th17细胞分化机制，雌二醇/ERα/REA轴可能是治疗复发性念珠菌性阴道炎的新靶点。