经过三年的艰苦工作,课题组已充分掌握基因敲除的关键技术,成功建立起基因敲除的技术平台。按照原定计划进行了部分研究构建针对Kir2.3的基因敲除载体,培养小鼠ES细胞,将基因敲除载体导入ES细胞,筛选出9个ES阳性克隆,将中靶ES细胞注射到小鼠囊胚中,再将囊胚种植到代孕母鼠的子宫中,获得了成功受孕的代孕母鼠。但是,由于无法得到嵌合体小鼠,迫使实验中断。课题组及时对试验进行了调整和补充。一方面,从药理学角度对电压门控性离子通道的功能进行研究,发现水杨酸钠能够抑制神经元细胞膜上电压门控性离子通道,并影响其电生理学特性;另一方面,在PCR筛选实验中,摸索出更加优化的筛查基因突变的PCR-SSCP试验方法。
英文主题词gene knockout; Kir2.3; voltage-gated ion channels; PCR-SSCP