本研究采用重组腺病毒载体感染小鼠未成熟树突状细胞,制备DC疫苗,在细胞水平及动物模型中研究其对CaSki细胞的杀伤作用,为研究宫颈癌的免疫治疗提供依据。 1.重组载体pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,经激光共聚焦显微镜、流式细胞术、Western blot检测,证明E6E7能有效表达。 2.分别将pAd-E6E7转染、CaSki细胞裂解物负载的DC,诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,观察DC疫苗对CaSki细胞的杀伤效应。结果表明前者具有显著的诱导CTLs杀伤CaSki细胞的作用。 3.将pAd-E6/E7感染DC,通过FCM检测表面标志物、Western blot检测E6蛋白、CCK8法检测T淋巴细胞的增殖及其杀伤效应,结果表明DC疫苗能够促进小鼠体内T淋巴细胞的增殖,对CaSki细胞有较明显的杀伤作用。 4.未成熟DC表达的蛋白质用2-DE分离得到了约660个蛋白点,获得了87个蛋白点的PMF图,利用MS-Fit工具收索,鉴定。其中与免疫调节功能相关的蛋白质有40个,与大分子代谢相关的有37个。 5.HSP70 siRNA可以有效抑制HeLa细胞增殖,促进其凋亡。
英文主题词dendritic cell;cervical cancer;vaccine; E6/E7 genes;immunotherapy