利用SMART RACE技术成功克隆安吉白茶茶氨酸合成酶基因(TS)和茶树钙调热激蛋白(CHSP)基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析。采用原核表达和体外酶试验法,对茶氨酸合成酶基因的功能进行了初步验证。利用重组蛋白进行体外酶催化试验,经HPLC检测表明,重组蛋白成功催化了茶氨酸的合成。利用SMART RACE技术首次成功克隆了安吉白茶泛素活化酶(UAE)基因、纺锤体分解相关蛋白(CDC48)基因、茶树2-硝基丙烷双加氧酶(NPD)基因以及丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 (STP) 基因的全长cDNA序列。成功构建了高效表达γ-谷氨酰转肽酶的基因工程菌,并对其重组酶的表达条件进行了优化。通过对双向电泳技术体系中样品制备、IPG预制胶条选择、裂解液配方等关键步骤的优化,构建了一套适合于茶树蛋白质组学研究的双向电泳技术体系。首次采用双向电泳技术对安吉白茶新梢生育期间三个典型时期的叶片蛋白质组进行分离。通过MALDI TOF/TOF MS对安吉白茶新梢生育期间30个重复性好,且在不同生育期间表达丰度发生1.5倍以上变化的蛋白质点进行质谱鉴定,其中有26个蛋白质点被成功鉴定。
英文主题词L-theanine; Full-length cDNA Cloning; Prokaryotic expression; Proteomics