分离以尘螨变应原免疫的志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,扩增编码免疫球蛋白G(IgG)轻、重链的基因,构建IgG的噬菌体抗体库。以尘螨主要变应原筛选出尘螨特异性的阳性克隆,检测其体内外阻断抗原的功能。对功能性阳性克隆进行链替换和可变区突变,以获得具最佳保护功能的IgG阻断性抗体。该抗体可与特应性母体中的尘螨过敏原结合,降低新生儿特应性,用于螨性过敏性疾病的一级预防即产前预防;也可中和新生儿体内的过敏原,用于二级预防。该抗体无Fc段,不易激活补体和激发其他免疫反应,具有安全性。
分离以尘螨注射液脱敏并证实具有高抗尘螨IgG水平的患者外周血淋巴细胞,提取总RNA,构建人免疫球蛋白基因库。并分离两个月内未曾患感冒等感染性疾病的300名志愿者的血淋巴细胞总RNA,构建正常人免疫球蛋白基因库。以饲养的尘螨螨体浸出液、培养基浸出液和重组II类变应原Der f2/Der p2作为抗原,以克隆印迹法和ELISA法筛选表达抗尘螨抗原的IgG Fab片段的阳性克隆。共筛选了约3×106个克隆,并进行了链更替或点突变,最终得到3个具有抗尘螨特异性,包括抗rDer f2/rDer p2活性的Fab片段。同时以rDer f2免疫转了人类免疫球蛋白基因的KM小鼠,获得2个具有抗尘螨特异性的人源单克隆抗体,并经链更替获得一组单克隆抗体Fab片段。对该5各单克隆抗体或Fab片段进行表面等离子共振BIOCORE检测,显示均有较高的亲和力。体外肥大细胞脱颗粒抑制试验和小鼠过敏性反应保护实验,均显示一定的保护作用,提示该单克隆抗体或Fab片段具有与过敏原结合的活性,可以作为IgG阻断性抗体进一步探讨其临床应用价值。在研究中发现过敏性疾病患者的免疫系统的特殊性,值得进一步深入研究。