中文摘要：

肺癌治疗抵抗后的侵袭转移是肺癌患者死亡的首要原因，对治疗产生抵抗的细胞在肺癌复发和转移中起着举足轻重的作用，但其机制仍然不清。有效的实验动物模型在肿瘤转移研究中举足轻重，而SCID鼠由于缺乏免疫环境，其荷瘤模型不能有效复制人体内的肿瘤转移过程，因此可以模拟人免疫功能的人源化小鼠是目前进行肿瘤转移研究的更好模型，而观察荷瘤动物模型最好的方式则是活体示踪连续观察。本研究将利用我们前期构建的独特的中国南方人肺癌治疗抵抗细胞株，建立人源化鼠肺癌治疗抵抗及转移模型，并联合先进的显微活体荧光观察技术进行肺癌的治疗抵抗后转移的研究。活体荧光示踪可以观察到单个肿瘤细胞在毛细血管中活动情况，采集在模拟人免疫环境下的癌细胞的生长和对基质、血管的侵袭及随后的远处转移数据，与普通SCID鼠进行对比试验，将为揭开肺癌治疗抵抗后转移的发生机制迈上前进的一步，并为制定相应的个性化的肺癌治疗模式和转移防治模式提供参考。

结论摘要：

本课题构建了模拟人体免疫环境的人源化小鼠，利用我们在前期的研究中构建的一株具有治疗抵抗的肺腺癌Am1010细胞，结合动物活体成像系统来观察绿色荧光标记的Am1010细胞在人源化小鼠体内侵袭及转移情况，并进一步探讨肿瘤体内侵袭及转移与机体免疫系统的关系。方法 1.分组异位肺癌模型人源化组（A组），异位肺癌模型非人源化组（B组）；非荷瘤人源化组（C组）；原位肺癌模型人源化组（D组），原位肺癌模型非人源化组（E组）。 2. NOD/SCID小鼠Am1010-GFP细胞悬液皮下种植成瘤。 3. PBMC悬液构建人源化小鼠模型，采用流式细胞仪、免疫组化及wesyern blot方法检测免疫重构后小鼠外周血中人T淋巴细胞的表达量及T细胞亚群的比例和小鼠脾脏，肝脏，肺脏组织中人T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T、CD8+T及Foxp3+Treg的表达情况。 4.活体荧光成像检测动物活体成像皮下肿瘤生长情况；原位肺癌模型组小鼠处死前行活体荧光成像检测动物活体成像肺内肿瘤原发灶及肿瘤转移情况。 5.异位肺癌模型组及原位肺癌模型组小鼠肿瘤组织采用HE染色方法观察肿瘤内淋巴浸润情况，并进一步采用免疫组化及wesyern blot方法检测人T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T、CD8+T及Foxp3+Treg的表达情况。 6.统计学方法所有实验数据应用SPSS13.0软件进行分析，统计学数据用均数±标准差(x- ˉ±s)表示，采用t检验及重复测量方差分析。结论 1.通过往NOD/SCID小鼠腹腔内注射人外周单个核细胞方法可建立人源化小鼠模型。 2.利用Am1010细胞在NOD/SCID小鼠体内可以建立皮下异位肺癌模型和原位肺癌模型。 3.通过对人源化荷瘤小鼠外周血、脏器及肿瘤组织内T淋巴细胞亚群的检测说明我们在小鼠体内重构的人免疫系统有较强的细胞免疫应答能力，能明显抑制肿瘤侵袭和转移过程。 4. 人源化小鼠的肺癌转移模型有望成为探讨机体免疫系统与肺癌侵袭转移相互作用的一种新的研究工具。