土壤盐渍化是影响和限制农作物生产的主要逆境因素之一。对多细胞的植物来说,在整体水平上精确调节钠离子的转运是其耐盐的关键问题,这涉及到不同组织/细胞(内、外层细胞)对钠离子转运的正确调节。模式植物拟南芥的研究表明,SOS1和HKT1基因在植物体特定组织/细胞内表达,以正确行使钠离子转运的作用。利用35S启动子过表达该类基因,由于在植物大部分细胞内均表达SOS1和HKT1基因,会导致植物体内钠离子转运的紊乱,转基因植株耐盐性的提高存在一定的局限性。本项目选用SOS1和HKT1基因自身启动子及其他组织/细胞特异性启动子,借助增强子元件的使用,实现组织/细胞特异性过表达SOS1和HKT1基因,以及调节SOS1蛋白定位于根表皮细胞远外侧,评价此类转基因植株的耐盐性。期望通过研究能深入了解组织/细胞特异性过表达离子转运基因对植物耐盐性的影响,从而为转基因提高植物抗性提供新的策略。
arabidopsis;plant salt tolerance;Na+/H+ antiporter;enhancer;tissue/cell-specific expressio
土壤盐渍化是影响和限制农作物生产的主要逆境因素之一。对多细胞的植物来说,在整体水平上精确调节钠离子的转运是其耐盐的关键问题,这涉及到不同组织/细胞(内、外层细胞)对钠离子转运方向的正确调节。模式植物拟南芥的研究表明,SOS1和HKT1基因在植物体特定组织/细胞内表达,以正确行使钠离子转运的作用。利用35S启动子过表达该类基因,由于在植物大部分细胞内均表达SOS1和HKT1基因,会导致植物体内钠离子转运的紊乱,转基因植株耐盐性的提高存在一定的局限性。本项目选用SOS1和HKT1基因自身启动子及其他组织/细胞特异性启动子,借助增强子元件的使用,探索组织/细胞特异性过表达SOS1和HKT1基因,以及调节SOS1蛋白定位于根表皮细胞远外侧,评价此类转基因植株的耐盐性。期望本研究能深入了解组织/细胞特异性过表达离子转运基因对植物耐盐性的影响,从而为转基因提高植物抗性提供新的策略。项目按计划执行,构建拟南芥SOS1、HKT1、GL2和NIP5;1基因启动子上添加增强子元件的一系列植物转化载体,转化拟南芥筛选纯合转基因株系,通过实时荧光定量PCR技术分析基因的表达情况,以及通过GUS染色技术分析其表达部位,结果表明在SOS1基因启动子某一位置添加增强子能部分原位增强基因的表达,提高纯合株系的耐盐性。而在HKT1、GL2和NIP5;1基因启动子上添加增强子元件未能原位增强基因的表达,其原因是增强子元件起作用位置的不确定性。