中文摘要：

近年的研究发现，核糖体蛋白在细胞信号转导特别是在调控肿瘤抑制因子p53稳定性中发挥重要作用，其功能的缺失与肿瘤的发生密切相关，对核糖体蛋白新功能的研究成为热点。但核糖体蛋白调控p53的分子机制有待于深入研究。我们的前期研究发现了一个能够与核糖体亚基蛋白RPS14相互作用的核蛋白-hCINAP，过表达hCINAP能提高p53的稳定性。那么，hCINAP是否通过调节核糖体蛋白来实现对p53的调控？本课题将结合生化分子生物学、细胞生物学及结构生物学实验方法，阐明hCINAP在核糖体蛋白-HDM2-p53通路中的调控作用，及对细胞周期和凋亡的影响，探讨hCINAP和核糖体蛋白在癌症发生中的作用。识别更多的通过HDM2-p53通路调节p53活性的核糖体蛋白，研究不同核糖体蛋白对p53活性的调节关系。解析相关复合物的三维结构，揭示调控p53活性的具体分子机制，为设计抑制肿瘤的药物靶点提供理论依据。

结论摘要：

肿瘤抑制因子p53在肿瘤发生发展中具有重要调控作用。核糖体亚基蛋白（RPs）-HDM2-p53是最近发现的影响p53活性的一条新的通路。鉴定新的参与到该通路中的核糖体亚基蛋白以及该通路的上游调控因子对于深入了解p53的调控机制和治疗肿瘤具有重要的生物学意义。人类蛋白hCINAP在真核生物体内是一个非常保守的蛋白，本研究发现人类蛋白hCINAP可能与一些核糖体亚基蛋白、RNA剪接因子以及癌症相关蛋白相互作用。免疫共沉淀以及体外pull-down实验证明hCINAP与核糖体小亚基蛋白RPS14有很强的相互作用。过表达RPS14能够抑制HDM2并促进p53的稳定性和活性。hCINAP能明显抑制由RPS14介导的p53的稳定性和活性。hCINAP通过招募去NEDDylation酶NEDP1来抑制RPS14的NEDDylation，导致RPS14的亚细胞定位发生改变和稳定性降低，从而使RPS14与HDM2的相互作用减弱，释放更多游离的HDM2结合p53，引起p53的泛素化降解。我们还发现hCINAP的另一个相互作用蛋白RPL6在调节p53活性中也具有重要的功能。当细胞处于核糖体压力刺激时，核糖体蛋白RPL6会从核仁内释放到核质中结合HDM2，并抑制HDM2介导的p53泛素化修饰和降解，从而增强p53蛋白的稳定性和活性，最终引发p53 依赖的细胞周期阻滞和细胞生长抑制。HDM2能使RPL6发生泛素化修饰和降解，减弱RPL6与HDM2的结合，从而形成一条负反馈调节机制，使得p53回复到正常水平。这些结果不仅发现了新的核糖体亚基蛋白RPS14和RPL6在RP-HDM2-p53通路中的调节作用，更为重要的是，我们还证明hCINAP是这条通路上游的一个重要调节蛋白。基于hCINAP与核糖体亚基蛋白的作用关系，我们还发现hCINAP对于核糖体18S rRNA的剪切、成熟以及核糖体40S 小亚基的组装以及细胞整体蛋白的合成是必需的。其调节作用与hCINAP的ATPase酶活性紧密相关。hCINAP在肿瘤细胞周期、凋亡和增殖中具有重要的调控作用。此外，本课题还揭示了hCINAP在NF-κB信号通路中的负调控作用，阐明了hCINAP通过招募PP1来抑制IKK磷酸化的分子机制。拓展了我们对于hCINAP生物学功能的认识，有助于进一步了解hCINAP在免疫疾病和肿瘤中的作用和机制。