中文摘要：

近来研究表明，在同种移植排斥反应中，CD4+T细胞有多种基因异常表达并与移植排斥密切相关。但受研究手段限制，目前仅对部分高表达基因进行了较深入研究，而对低拷贝基因了解甚少。基因表达系列分析（SAGE）是新近发现的能在基因组水平对已知/未知基因转录本同时进行定性定量分析的技术，对发现低拷贝基因非常敏感。利用该技术，通过对比观察同种移植/同系移植个体的CD4+T细胞基因表达状况，筛选、分离差异表达基因，可望从中找出引起同种移植排斥的相关和关键的低拷贝基因，从而从基因组水平上阐明移植排斥的分子机理。本研究拟以CD4+T细胞－SCID小鼠制备同种移植急性排斥模型，利用SAGE技术结合计算机软件处理技术，在基因组水平研究同种移植急性排斥高峰期CD4+T细胞基因表达状况，旨在建立小鼠同种移植急性排斥SAGE标签库，寻找引起同种移植急性排斥的低拷贝关键基因，为阐明同种移植急性排斥的分子机理奠定基础。

结论摘要：

从基因组水平深入研究急性移植排斥的分子机理，有利于从根本上预防和治疗急性移植排斥。尽管目前已有多种方法如微阵列或RT-PCR被用于研究移植排斥相关的高表达基因，但是参与和调节这一复杂过程的确切机制仍有待进一步阐明。本项目应用基因表达系列分析（SAGE）技术建立小鼠同种移植急性排斥模型排斥高峰期和同系移植对照模型CD4+T细胞的标签库，分别得到51,808 和 51,644个标签，其中识别出的基因总数为13,726和13,386，对比分析2个文库，发现402个标签具有统计学显著差异。应用结合标签的基因序列延伸(GLGI)技术成功地延长了20个差异表达标签，进一步确定其对应基因，并证实在20个标签中，有18个标签对应的基因与SAGEmap中匹配的可信基因相符。此外，我们还应用实时定量PCR验证5个差异基因的表达情况，进一步证实了SAGE文库的可信性。通过对差异表达基因进行功能分类，发现多种凋亡，信号转导，蛋白合成等功能相关基因的差异表达。该研究为深入探讨急性移植排斥机理，从根本上治疗和预防移植排斥反应奠定了实验基础。