中文摘要：

随着免疫学的发展，人们己经认识到有效的免疫反应是由具有MHC限制性的抗原决定簇，也就是抗原表位(epitope)引起的。而且只有符合宿主MHC限制性的表位，才能有效的识别宿主的MHC分子，激活T细胞，激发宿主的免疫应答。为了探索一种用于人类的弓形虫疫苗，本课题拟采用生物信息学和分子免疫学的方法，筛选优势的具有保护性的弓形虫抗原的HLA限制性表位， 构建具有HLA限制性的弓形虫表位疫苗，通过HLA转基因小鼠模型评估疫苗的免疫效果。对弓形虫抗原表位诱导具有相同HLA限制性宿主的免疫应答的机制进行研究，对弓形虫记忆性CD4+T细胞,CD8+T细胞的作用和定位进行追踪；为有效的激发宿主的免疫记忆，调控宿主的免疫应答提供理论依据和策略；不仅对人类弓形虫疫苗的研究，也必将对人类其它寄生虫及感染性疾病的疫苗研究指出了一个新方向。

结论摘要：

弓形虫感染可以导致多脏器损害，破坏大脑、心脏、眼底，可使全球人口的30-50％慢性感染，引起精神，神经症状和行为的改变。孕妇感染还可导致畸胎、死胎，存活者也常有畸形及智力发育不全等严重后遗症。因此，研究能够用于人类的弓形虫疫苗十分迫切。本课题从弓形虫各期保护性抗原中筛选出能具有HLA或H-2限制性T，B细胞表位肽，选用不同的佐剂和载体携带，成功构建了具有MHC限制性的弓形虫表位组成的多价核酸和多表位疫苗。筛选获得21个具有HLA的表位肽HLA-A*0201限制性的CD8+ T cell表位肽13个；HLA-A*1101限制性的CD8+ T cell表位肽6个；HLA-B*0702限制性的CD8+ T cell 表位肽2个；HLA限制性CD8+ T细胞表位肽与CD4+ T细胞通用表位PADRE和佐剂GLA-SE及Pam2Cys联合应用免疫HLA-A*0201, HLA-A*1101，HLA-B*0702转基因鼠比对照组转基因鼠腹腔中的速殖子数量明显减少，生存时间延长；编码缓殖子特异性抗原SAG2C，-2D，-2X 的基因疫苗单独或者混合均可以有效的诱导小鼠产生有效的体液和细胞免疫应答。该核酸疫苗可作为控制弓形虫慢性感染过程中脑组织包囊形成的有效的候选疫苗。CD8+ T细胞优势抗原表位VPNSSLVEN和SQFLSLSLL在体外可刺激记忆性淋巴细胞明显增殖，是表位疫苗的候选表位；弓形虫速殖子SAG1/SAG3-CTXA2/B复合基因疫苗，免疫鼠抗I型弓形虫攻击获得了40%的生存率；以泛素为佐剂的弓形虫多表位重组腺病毒疫苗不仅增强了多表位疫苗的免疫原性，而且通过DNA疫苗初免-重组腺病毒疫苗加强免疫策略获得更好的抵抗弓形虫感染的保护力；通过乳化交联法获得壳聚糖微球颗粒，使之吸附结合GRA10复合表位肽，获得装载GRA10复合表位肽的壳聚糖微球疫苗，小鼠脑包囊形成率降低50%。 本研究的意义在于探索一种关于疫苗研究的新思路，选取具有MHC限制的，能够被弓形虫阳性病人识别弓形虫T，B细胞抗原肽，可以直接被提呈给T,B淋巴细胞，从而产生激活T、B淋巴细胞的信号，启动免疫应答。从弓形虫病患者体内筛选出具有MHC限制性的表位，构建具有MHC限制性的表位疫苗和核酸疫苗，不仅对人类弓形虫疫苗的研究，也必将对人类其它寄生虫及感染性疾病的疫苗研究指出了一个新的方向。