中文摘要：

"活的非可培养状态"(VBNC) 是指细菌在不良环境下的一种特殊存在形式，细菌虽然丧失了在培养基上生长繁殖的能力，但仍保留了病原菌的抗原成分、毒力因子，在适宜条件下可以复苏，重新对周围的环境及人类安全构成威胁。充填后的根管作为一个特殊的小生境，低氧张力、营养因素缺乏，而粪肠球菌却仍可以在饥饿环境中继续生存，导致再感染。细菌的这种状态是否属于VBNC状态，目前尚不清楚。本研究以粪肠球菌临床分离株、标准菌株作为研究对象，筛选粪肠球菌进入VBNC状态及复苏条件，利用CLSM、色谱分析等多种手段、多角度对比分析VBNC前后，细胞形态、细胞生理生化特性的改变；并进一步应用代谢组学及SSH方法寻找粪肠球菌进入VBNC状态代谢指纹图谱/差异基因信息，从代谢/转录水平阐述VBNC状态的的发生机制，从而为根管感染、再感染发病机制及其控制策略提供理论依据。

结论摘要：

粪肠球菌是口腔常见致病菌，尤其是在根管再感染的样本中，是检出率最高的细菌。分析粪肠球菌逃逸根管治疗过程中多种抑菌手段的致病机制，对于治疗并预防根管治疗失败所致再次感染，具有较高的临床意义。 本研究在实验室条件下，诱导粪肠球菌进入“活的非可培养”状态，并分析在此状态下细菌的生理，生化特性，以及与其致病能力相关的特性，如产酸耐酸能力，粘附能力，基因表达变化情况等进行研究。结果显示粪肠球菌在多种恶劣的条件下均能进入到“活的非可培养”状态，并通过发生形态改变，减少代谢反应和基因表达等活动，抵抗环境变化带来的损害。我们发现，“活的非可培养”状态的粪肠球菌，细胞形态变的不规则，细胞膜和细胞壁分离，对物质代谢的水平下降，不能分解正常状态粪肠球菌代谢的糖醇类，但仍保持对蔗糖等底物。同时，此时的细菌仍能够具有一定的产酸，粘附等致病能力及表达部分致病相关基因，在适宜条件下，仍能够恢复细胞增长分裂，恢复致病能力，对宿主健康产生威胁。 本课题研究结果从一定程度上说明粪肠球菌进入“活的非可培养”状态是其抵抗恶劣环境的一个可能机制。进入“活的非可培养”状态的粪肠球菌，其生物学特性，形态，产酸能力，粘附能力，基因表达均发生较大变化。体外研究结果进一步补充了根管感染的细菌病因学学说，为今后临床根管感染治疗工作从疾病源头控制，提供了理论依据。同时也为口腔内细菌学的进一步研究奠定了基础。