中文摘要：

化疗是治疗乳腺癌的重要辅助性手段，而多药耐药(multidrug resistance,MDR)常使化疗失败，给乳腺癌的治疗造成很大障碍。MDR是指肿瘤细胞对一种化疗药物出现耐药性的同时,对其它未接触过的、结构不同和靶位各异的化疗药物也具有交叉耐药性。近年来葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase, GCS)介导的凋亡调控与MDR方面的研究引起了人们的关注。 miRNA(microRNA)能通过与靶mRNA特异性的结合引起其降解或抑制其翻译。近来miRNA作为新的研究切入点，为肿瘤MDR的研究开辟了一条新途径。本课题拟设计并合成GCS基因靶向的microRNA序列，构建miRNA的表达载体，转染耐药乳腺癌细胞和动物移植瘤模型，观察GCS基因靶向的miRNA在体内外对GCS及相关乳腺癌耐药基因及药物敏感性的作用效果，为提高乳腺癌的化疗效果提供新的途径。

结论摘要：

多药耐药（MDR）是乳腺癌化疗失败的主要原因，近年来，葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）介导的凋亡调控与MDR方面的研究引起了人们关注。microRNA是调控真核基因表达的重要分子，microRNA与基因治疗及调控等方面日益受到重视。本研究首次构建含有特异性靶向GCS的microRNA表达载体，转染了耐药乳腺癌细胞，发现GCS靶向的microRNA表达载体明显抑制了GCSmRNA和GCS蛋白的表达，利用MTT检测发现，GCS靶向的microRNA表达载体转染耐药乳腺癌细胞后，细胞对长春新碱、紫杉醇和阿霉素等化疗药物的耐药性明显降低，说明GCS靶向的microRNA能明显抑制耐药基因GCS的表达并显著提高乳腺癌细胞对多种化疗药物的敏感性。通过检测多药耐药基因1（mdr1）发现，GCS靶向的microRNA表达载体明显下调了mdr1mRNA和P-糖蛋白（P-gp）表达水平，同时明显抑制了P-gp外排功能。在体内实验中，我们通过乳腺癌细胞动物移植瘤模型的建立， GCS靶向的microRNA在体内能够有效抑制GCS 和 mdr1基因的表达。本研究为乳腺癌的临床基因治疗奠定了良好的实验基础，为提高乳腺癌的化疗效果提供了新的途径。