本研究课题在特定的条件下离体及在体诱导骨髓间充质干细胞分化为类视网膜色素上皮细胞(RPE),并用RT-PCR方法检测分化后的类RPE细胞是否正常表达RPE细胞的特异性基因MERTK和RPE65,用双重荧光标记法检测类RPE细胞是否具有特异性吞噬功能,用膜片钳技术和Fura-3/AM荧光染色法检测类RPE细胞细胞内Ca2+信号转导系统建立情况,并用特异性的Ca2+信号激动剂和抑制剂以及酪氨酸激酶激动剂和抑制剂处理类RPE细胞,检测相应的MERTK基因表达变化情况和Ca2+信号的变化情况,明确分化后的类RPE细胞是否具有完整、正常的细胞功能;同时观察骨髓间充质干细胞在体移植后的生物学特性及对视网膜色素变性动物模型的视功能改善情况,为自体骨髓干细胞视网膜移植的临床应用奠定坚实的理论及实验基础。
视网膜色素上皮细胞的重要生理功能为吞噬视网膜神经上皮层脱落的视节膜盘,使视网膜神经细胞所处的微环境保持不断更新的状态,当此功能障碍是就会导致严重的视网膜疾病,目前RPE细胞移植是治疗这类疾病有效的手段,但异体细胞存在排斥,自体细胞来源受限,因此选择合适的细胞来源是治疗的关键。本研究课题在特定的条件下离体诱导骨髓间充质干细胞分化为类视网膜色素上皮细胞(RPE),并用RT-PCR方法检测分化后的类RPE细胞是否正常表达RPE细胞的特异性基因MERTK和RPE65,用双重荧光标记法检测类RPE细胞是否具有特异性吞噬功能,用膜片钳技术和Fura-3/AM荧光染色法检测类RPE细胞细胞内Ca2+信号转导系统建立情况,明确分化后的类RPE细胞是否具有完整、正常的细胞功能,为自体骨髓干细胞视网膜移植的临床应用奠定坚实的理论及实验基础。