为了推进鱼类免疫遗传学,根据草鱼MHC 基因(Ctid-MHC) 序列设计引物对,采用荧光原位PCR法对Ctid-MHC在染色体上的位置进行定位。随后采用细菌人工染色体(BAC)构建草鱼基因组文库,根据MHC I和MHC II连锁、单倍遗传等特性,用dig 标记的Ctid-MHC探针克隆3-5株BAC阳性重组子,绘制其插入DNA限制性内切酶图谱。再进一步筛选、测定150kb-200kb 的Ctid-MHC I连锁序列、绘制其染色体核酸序列图。阐明与Ctid-MHC I-UA 连锁的MHC IIa、MHC II b 等免疫主效基因座数、排列顺序;同时得到Ctid-MHC I-UA 邻近的新免疫应答基因NK细胞受体基因、补体基因、TAP基因、细胞因子等基因。为进一步以MHC为重要数量性状基因座(QTL)、培育出我国经济鱼类-草鱼的抗病品种打下基础。
2004-2006年间,我们完成了"草鱼MHC I 基因定位与染色体连锁基因序列图谱" 项目(编号30371098),将草鱼MHC研究推到了学科前沿。已发表SCI论文2篇,投稿中的SCI论文1篇;整理中的SCI论文2篇。培养了3名博士、1名硕士。具体情况如下。 2004年度构建了草鱼基因组文库。分析了草鱼群MHC I 轻链基因组结构。 2005年度Southern Blot分析了Ctid-MHC I 有4个拷贝;3D-PCR筛选出了相关的5个MHC I Fosmid克隆。表达了MHC I,分析了其高级结构。 2006年度散弹法构建了2个亚克隆文库,对插入MHC I 相关 DNA进行了测序;获得了草鱼MHC I 核心基因座序列;进行了染色体定位。另外,获得了草鱼MHC II a、MHC II b、IFN-a, Mx、CD8a、IgM和b2m Fosmid阳性克隆。