中文摘要：

原发性肺癌的发病率和死亡率逐年攀升，传统治疗手段其疗效已进入平台期。以表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR－TKI）为主的分子靶向治疗正广泛应用于临床，疗效确切，但几乎所有患者最终都会发生耐药。因此寻找逆转TKI耐药及更新、更有效的靶向治疗药物已成为现代肿瘤学研究热点。中药水煎剂为中药临床应用传统剂型，充分体现了中医辨证论治的思想精髓。本课题组既往研究表明南方红豆杉水提物主要活性物质为非紫杉醇及紫杉烷类复合物，有着与紫杉醇完全不同的抗肿瘤特性。前期研究结果表明南方红豆杉水提物可显著抑制EGFR表达，下调Survivin蛋白，诱导EGFR表达的肺癌细胞凋亡。本项目将在此基础上，进一步研究其对EGFR－TKI耐受肺癌细胞的活性及其分子机制，为临床合理用药提供理论基础。

结论摘要：

目的: 明确南方红豆杉水提物对T790M突变和c-Met基因扩增的5种细胞株的干预作用，并进一步明确其作用机制。方法分别对人肺腺癌细胞株PC9、PC9/R、A549、H1975、H820（H1993）进行体内、体外及血清实验。各个细胞株干预组为南方红豆杉水提物组（细胞实验及血清试验分高中低剂量组）、吉非替尼组及南方红豆杉水提物联合吉非替尼组，同时设空白对照组。对细胞或组织行MTT（CCK8）、RT-PCR、Western-blot、DNA测序、免疫组化等实验，以检测南方红豆杉对吉非替尼耐药细胞株的调控作用。结果体内外实验结果表明，对PC9、PC9/R、A549、H1975、 H820（H1993）等多种细胞株，南方红豆杉水提物联合吉非替尼较对照组能显著抑制细胞或移植瘤的增殖(P<0.05)，且其抑制作用较吉非替尼单药组有显著提高(P<0.05)，即两者有协同作用。南方红豆杉水提物单药也对多种细胞株及移植瘤具有一定的抑制作用，且呈一定的剂量-效应关系。Western-blot结果显示，南方红豆杉水提物联合吉非替尼能显著下调EGFR及其下游相关的ERK1/2通路，JAK2/STAT3通路，PI3K/AKT通路以及EGFR旁路HGF/Met通路相关蛋白的表达（P<0.05）。南方红豆杉水提物单药较对照组能下调上述通路相关蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果表明南方红豆杉水提物联合吉非替尼较吉非替尼组，南方红豆杉水提物较对照组能显著下调上述通路的相关mRNAmRNA表达（P<0.05）。 结论1.体内外实验研究结果表明，南方红豆杉水提物能抑制A549、H820（H1993）、H1975、PC9、PC9/R细胞的增殖，具有较广的抗瘤谱，并呈一定的剂量-效应关系。2.南方红豆杉水提物联合吉非替尼，较吉非替尼单药抑瘤明显，两药联合后达到IC50时的合用指数均小于1，具协同作用。3.南方红豆杉水提物联合吉非替尼较吉非替尼单药抑瘤明显且具协同作用的可能机理是通过下调T790M突变及c-MET基因扩增抑制EGFR及其下游信号通路PI3K/AKT、EGFR/ERK、JAK/STAT3和旁路HGF/MET的激活，克服吉非替尼耐药。