酶的定向进化技术能有效用于提高酶的活性、专一性和稳定性等性质。本研究以地衣芽孢杆菌LS04的漆酶为研究对象,通过易错PCR和DNA改组技术建立突变基因库,采用毕赤酵母作为表达宿主,利用其能将重组蛋白分泌到胞外的特性,建立适合于细菌漆酶定向进化的高通量筛选方法,从突变文库中快速高效的筛选出活性高且能有效用于染料脱色的突变漆酶。在所获得高活性突变体的基础上,通过优化毕赤酵母表达条件,实现突变漆酶基因的高效重组表达。利用蛋白层析纯化系统对重组漆酶进行分离纯化,研究其酶学特性并测试其在染料脱色上的应用潜力。通过本研究的实施,在有效提高地衣芽孢杆菌漆酶活性和产量的同时,由于采用胞外表达简化了后续的纯化工艺,有利于进一步降低重组漆酶的生产成本,为推动该漆酶在工业上的应用奠定基础。
英文主题词bacterial laccase;directed evolution;expression optimization;enzymatic properties;dye decolorization