中文摘要：

肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinomas, HCC）的恶性程度高、预后不良，因此认识它的发生发展机制，提高早诊率非常重要。但目前临床上常用的标志物甲胎蛋白对于早期患者的诊断价值十分有限。本研究在前期通过两种互补的蛋白质组学研究策略得到的差异表达蛋白谱的基础上，构建蛋白质相互作用网络，评价与肝细胞癌变密切相关的关键通路和节点，筛选多个重要的候选蛋白，进行大规模的组织学和血清学临床样本回顾研究，评价它们的早期诊断价值。同时在不同特性的HCC细胞中，利用RNAi敲降其表达，获得稳定细胞株，观察它们对细胞增殖、凋亡、侵袭转移能力的影响，以及在裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和转移中的差异，结合信号通路分析，探讨候选蛋白在癌变中的具体作用机制。研究结果不仅有利于发现新的HCC早期诊断标志和治疗干预靶点，而且有利于揭示HCC发生发展分子机制，对其早期诊疗将具有重要的理论和临床应用价值。

结论摘要：

肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）为全球第五大常见恶性肿瘤。其早期无明显症状，患者确诊时多是中晚期，预后较差，因此是目前医学研究的难点和热点。申请人利用前期通过两种定量蛋白质组学策略鉴定到161个肝癌差异表达蛋白质，在本项目中进一步利用网络生物学的方法，构建了肝癌相关差异表达蛋白的相互作用网络，从中找到多个在网络中明显富集，且具有重要功能意义的节点分子，包括annexin A2和蛋白X。深入的大样本的验证分析结果发现，annexin A2在HCC肿瘤组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织，HCC患者血清中annexin A2水平明显高于健康人、肝炎、肝硬化和良性肝肿瘤等非癌对照个体，以及乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胃癌和肺癌等其他肿瘤患者。Annexin A2水平在83%的早期肝癌和78%的AFP阴性HCC患者血清中明显升高，其对于早期肝癌的诊断效果明显优于AFP。联合检测annexin A2和AFP能将早期肝癌的诊断灵敏度和特异度提高到87.4%和68.3%，明显提高HCC尤其是早期HCC的诊断率。进一步在p21-HBx转基因小鼠肝癌模型中的验证，提示血清annexin A2水平的变化反映了肝细胞的恶性转化和疾病进展。另一个分子蛋白X在HCC细胞中存在明显的从细胞核到细胞浆的异位表达，胞浆中蛋白X的高表达与更恶的肿瘤生物学行为相关。生存分析显示，胞浆中高表达的蛋白X水平与HCC患者短的无复发生存时间和总生存时间相关，其对于预测短期复发，尤其是6个月内的复发效果较好。胞浆中的蛋白X表达水平、肝硬化程度和TNM分期为预测HCC患者无复发生存的独立危险因素。而且HCC患者的血清蛋白X表达水平也明显高于健康对照。综上所述，annexin A2是HCC独立的血清学标志物，联合AFP有助于HCC的早期诊断。而胞浆中蛋白X的异位表达是影响HCC患者无复发生存的独立因素，可能在HCC发生发展过程中发挥重要作用。本项目执行三年以来共发表标注基金号文章4篇，其中SCI文章2篇，中文核心期刊2篇，授权中国发明专利1项，申请专利1项，发表国际会议摘要4篇，国内会议摘要4篇，培养研究生3人，为HCC的早期诊断和预后判断提供了有价值的候选标志分子，为后续研究中深入探讨它们在肝细胞癌变中的作用，寻找新的治疗靶点和HCC的临床诊治提供借鉴。