针对抗体类药物分离纯化的特殊要求,围绕混合模式吸附层析,开展了新型介质制备、分离机理探讨和相关应用研究,实现了抗体的经济高效分离。主要成果包括三个方面第一,新型层析分离介质的设计和制备以纤维素为主要原料,制备多孔复合微球,实现基质的高密度活化;结合疏水、静电和亲硫作用,设计和筛选多功能配基,成功制备了系列新型混合模式层析介质。第二,混合模式层析分离抗体的机理探讨以多种免疫球蛋白为对象,系统考察了新型介质的吸附和解吸性能,发现抗体吸附容量大,选择性高;深入探讨了混合模式吸附机理,提出了pH控制和盐促吸附观点;进一步建立了分子模拟方法,研究配基-抗体间相互作用,从分子水平验证了独特的分离机制。第三,混合模式层析分离抗体的应用以天然蛋白资源为原料,探讨混合模式层析分离新方法,证实新型介质具有良好的抗体分离性能,免疫球蛋白收率高,纯度达到90%以上;进一步应用于细胞培养液中分离单克隆抗体,发现新型介质可以替代Protein A亲和介质,实现单抗的高效分离,纯度达98%以上。本项目研究充分证明了混合模式层析分离抗体的可行性、实用性和通用性,为构建抗体分离新平台奠定了良好基础。
英文主题词antibody; purification; mixed-mode chromatography; ligand design