中文摘要：

认知缺陷是早产儿脑损伤主要后遗症，与皮层神经元的选择易损性密切相关，但神经元损伤的机制尚不清楚。我们前期研究发现TRAIL-DR5死亡信号通路介导神经元损伤，鉴于miRNA-212与死亡信号的调节密切相关，本项目将进一步探讨miRNA-212是否调控上述死亡信号通路及相关的机制。拟在原有基础上，采用新生小鼠缺氧缺血脑损伤动物模型与TRAIL诱导的神经元损伤细胞模型，利用免疫组化、分子生物、神经病理、神经行为等技术，观察(1)miRNA-212及靶蛋白的表达与神经元凋亡的关系。（2）利用miRNA获得与缺失技术上调与下调miRNA-212的功能，观察TRAIL-DR5信号下游分子的变化与神经元的损伤的情况。探讨（1）miRNA-212是否调控TRAIL-DR5信号通路；（2）miRNA-212通过哪些关键蛋白调控TRAIL-DR5信号通路发挥神经保护作用，为早产儿脑损伤的防治提供新思路。

结论摘要：

早产儿脑室周围白质损伤同时伴有灰质神经元/轴突的病变，肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)与其死亡受体(DR)、诱骗受体(DcR)受体结合，参与中枢神经系统多种炎性反应性疾病，但在早产儿脑损伤中尚见报道；研究发现①HI 后 24h，免疫组化显示损伤侧皮层表达大量 TRAIL、死亡受体DR5、诱骗受体DcR1、DcR2 阳性细胞（P＜0.05）。并且损伤侧皮层TRAIL/CD68 双阳性细胞数目明显高于对照侧。②Western blot 和RT-PCR结果显示损伤侧皮层大量表达 TRAIL、DR5 蛋白（P＜0.01）。第二，DR6也是与神经细胞损伤及凋亡密切相关，本项目发现HIBD 组皮层DR6 表达在HIBD 后24 h 最显著，72 h、7 d 逐渐下降（P<0.01）；HIBD 后24、72 h，HIBD 组DR6 表达量均高于对照组（P 均<0.01）。HIBD 后24 h，HIBD 组皮层Caspase-3 阳性细胞高于对照组P<0.05）。HIBD 后7 d，HIBD 组皮层神经元数目低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。HIBD 后60 d，T-迷宫试验显示HIBD 组认知下降（P<0.05）。 发现DR6 信号通路在未成熟脑神经细胞损伤中起重要作用，可能导致以后认知功能障碍。第三、探讨围产期反复感染对未成熟脑炎症及髓鞘发育的影响，与对照组和宫内感染组相比，Western blot结果显示反复感染组炎症因子TNF-a和Caspase-3的表达水平均明显高于宫内感染组与正常对照组（均P<0.01）；髓鞘发育情况评估显示反复感染组MBP蛋白表达量明显低于宫内感染组与正常对照组（P<0.01）。生后13 d时反复感染组小鼠神经反射完成时间均明显长于其它组。④实验结果显示相对于神经元+PBS刺激组，在给予miR212的抑制剂后，PEA15蛋白表达上升，DR5，FADD和caspse3表达下降, 细胞存活率下降（P< 0.05） ;给予miRNA-212的mimic后，PEA15蛋白表达下调， DR5 、 FADD和caspse3表达上升, 细胞存活率增加（P<0.05）.在给予miR212的抑制剂+TRAIL12小时后, PEA15蛋白表达下调，DR5，FADD和 和caspse3表达上升显著,细胞存活率增加（P<0.05）。