中文摘要：

白癜风是一个细胞免疫介导的自身免疫性疾病，发病率高、难根治。我们在前期GWAS及转录组学的研究基础上首次发现白癜风的皮损中有NK细胞浸润，因此我们认为NK细胞在白癜风的发病中可能发挥重要作用。为此，收集样本通过免疫荧光技术及流式细胞技术进一步验证NK在白癜风皮损中的浸润；体外研究白癜风患者皮损中的NK及外周血中的NK细胞与正常对照人群的NK细胞的分子标记是否有差异，同时研究其炎症因子表达谱的差异；体外研究NK细胞对黑色素细胞的细胞毒作用，并通过特异性的抑制剂等初步研究NK杀伤黑色素细胞的分子机制；此外，利用体外皮肤重建技术模拟体内环境，观察NK在重建皮肤组织中是否具有杀伤黑色素细胞的作用。初步阐明NK细胞在白癜风发病中的可能发挥的作用，为白癜风的诊断治疗提供新的思路和方向。

结论摘要：

白癜风是一个细胞免疫介导的自身免疫性疾病，发病率高、难根治。本课题组在前期GWAS及转录组学的研究基础上首次发现白癜风的皮损中有NK细胞浸润，因此我们认为NK细胞在白癜风的发病中可能发挥重要作用。此研究希望通过免疫荧光技术及流式细胞术等方法进一步研究NK细胞在白癜风发病机制中的作用。本课题组利用DNA芯片技术对白癜风皮损（LS）、非皮损（NLS）和正常皮肤组织（NS）进行基因表达研究，通过对比分析发现有30个存在基因表达存在显著差异（1）LS和NS相比，有17个基因是表达下调（大部分基因功能与黑色素细胞相关，包括TYRP1，TYR等）和13个基因为表达上调（大部分基因功能与先天免疫的调控因子相关，包括CLEC2B，NKG2D等），这些结果并进一步通过实时定量PCR得到验证；（2）LS、NLS和NS相比较，发现大部分在皮损区表达下调的基因在对照和非皮损区都为正常表达，相反，在皮损区表达上调的基因在非皮损区同样也是表达上调，这表明先天免疫的激活不仅仅是在皮损区，可能白癜风患者全身皮肤都有涉及。通过流式细胞术对白癜风皮损区和非皮损区的NK细胞定量研究发现，正常对照皮肤中NK细胞数量较少（少于5%），皮损区较多（24%），非皮损区相对对照也有增多（12%）。此外，通过体外白癜风皮损培养后检测发现其丝氨酸蛋白酶和颗粒酶B水平显著增高，表明这些NK细胞为高度活跃状态且与靶细胞接触时可以发挥细胞毒性作用。我们接下来通过免疫荧光显微术研究发现，白癜风皮损及非皮损区都有NK细胞活化的证据，包括NK活化受体升高及NK细胞的浸润。本研究是首次在白癜风皮肤组织中发现存在NK细胞的显著和异常升高。而且，有些NK细胞，直接位于黑素细胞周边，且表达活化受体（NKG2D)，说明NK细胞可能直接参与黑素细胞的杀伤过程。这些研究结果表明先天性免疫反应（特别是NK细胞）在白癜风发病机制中起重要作用，同时由于白癜风皮损区和非皮损区都存在先天免疫的异常活化提示未来针对白癜风的治疗上可以考虑全身整个皮肤一起治疗也许会起到更好的效果。课题组近期研究又发现多个自然杀伤细胞的细胞表面激活受体表达升高；皮损部位中的免疫抑制机制失灵，包括一种全新的自然免疫停损细胞显著降低；皮损部位变异激活细胞因子和趋化因子明显调高。本研究不仅进一步揭示了白癜风的发病机制，同时为临床上白癜风的治疗提供了一定的参考和指导意义。