研究内容: 羟基红花黄色素A是红花中具有促心脑组织新血管生成的有效单体成分。本项研究运用细胞和组织培养、分子生物学和生物化学技术,利用流式细胞仪和大分子受体相互作用仪等手段,从细胞和分子水平对其促新血管生成机理进行探讨,为建立以受体和酶为靶点,快速、稳定、定量和经济的促新血管生成剂筛选模型提供理论和实验依据。研究意义:为揭示以中药红花为代表的天然血管生成剂促新血管生成的作用机制提供理论依据,在此基础上建立新的以受体和酶为靶点,具有高效、稳定、定量和经济等特点的促血管生成剂筛选模型。
本项目采用体内外结合的方法对红花中含量最高的单体化合物- - 羟基红花黄色素A(HSYA)促血管新生作用的分子机制进行初步探讨。功能类血管新生基因芯片结合细胞生物学研究结果发现HSYA可通过上调缺氧诱导因子(HIF-1)转录和蛋白水平的表达,促使其下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)的表达,促进血管内皮细胞释放VEGF,诱导低氧状态下内皮细胞蛋白质的合成,促使细胞的增殖和迁移,该作用可被VEGF及其受体的抗体所减弱,且大分子相互作用试验证实HSYA没有与VEGF及其受体KDR和Flt结合,提示VEGF及其受体并非是HSYA促血管新生的直接作用靶点。流式细胞术研究证实HSYA可呈时间和浓度依赖性拮抗低氧所致血管内皮细胞的凋亡,减少细胞在G0/G1期滞留,促进细胞进入S期;分子生物学技术研究结果显示,HSYA可明显上调细胞凋亡开关基因Bcl-2/Bax的表达比率,此作用与其促进低氧条件下内皮细胞的增殖强度相对应,说明HSYA在激活HIF-VEGF信号转导途径从而促进血管内皮细胞进入增殖程序的同时,也具有通过上调凋亡开关基因从而发挥拮抗缺氧所致细胞凋亡作用。