中文摘要：

核心岩藻糖是在核心岩藻糖基转移酶催化下形成的，在肝癌转移中发挥重要作用。前期工作中，我们从肝癌细胞核中提取并鉴定了不均一核糖核蛋白（hnRNPA/B）的核心岩藻糖基化，发现hnRNPA/B核心岩藻糖基化不仅与肝癌细胞转移潜能密切相关，且影响肝癌细胞侵袭转移能力。本课题通过RNA干扰或过表达核心岩藻糖基转移酶以干预hnRNPA/B的核心岩藻糖基化，观察干预前后hnRNPA/B亚细胞定位的变化；应用实时定量PCR观察干预前后OPN等肝癌转移相关基因表达的变化，明确hnRNPA/B核心岩藻糖基化在影响肝癌转移过程中调控的关键基因；应用染色质免疫沉淀、荧光素报告基因分析干预前后肝癌细胞表达的hnRNPA/B转录活性的改变及其对关键基因转录调控的影响；进而采用RNA干扰技术对筛选出的关键基因进行体内、外功能研究，明确其在肝癌侵袭转移中的作用。通过上述研究，为探讨肝癌治疗中新的干预靶点提供实验依据。

结论摘要：

核心岩藻糖是在核心岩藻糖基转移酶催化下形成的，在肝癌转移中发挥重要作用。我们鉴定了不均一核糖核蛋白（hnRNP A/B）的核心岩藻糖基化，发现hnRNP A/B核心岩藻糖基化影响肝癌细胞侵袭转移能力。通过过表达核心岩藻糖基转移酶干预hnRNP A/B的核心岩藻糖基化，发现转染其过表达质粒后，hnRNP A/B由细胞浆转位到细胞核，在细胞核中的表达明显上升。我们还发现hnRNP A/B核心岩藻糖基化可以影响OPN的表达，而OPN表达水平升高与肝癌患者的临床病理特征和患者预后不良相关，体外干扰OPN基因的表达后，肝癌细胞的侵袭和增殖能力均明显下降。提示hnRNP A/B核心岩藻糖基化可通过调控OPN基因的表达影响肝癌侵袭转移。我们通过chip-PCR和荧光素报告基因试验鉴定hnRNP AB潜在的靶基因, 发现snail可能是hnRNP AB的靶基因。肝癌细胞过表达hnRNP A/B后，snail表达显著升高，细胞呈现上皮间质转化（EMT）形态, 侵袭能力明显增加；在过表达hnRNP A/B的肝癌细胞中转入shRNA-snail质粒，细胞EMT形态变化丧失，侵袭能力明显下降。体内实验表明hnRNP A/B和snail表达水平呈显著正相关，hnRNP A/B上调可以促进snail表达而诱导EMT过程。我们研究了hnRNP AB家族成员hnRNP A1与肝癌转移的关系。发现hnRNP A1在高转移肝癌细胞系和复发的肿瘤组织中表达增高。在肝癌组织中hnRNP A1表达与CD44v6呈正相关，hnRNP A1是肝癌患者预后的独立影响因素。体外实验表明hnRNP A1通过调节CD44v6的表达促进肝癌转移。该结果以第一作者发表在“Int J Cancer”（2013年）。除了完成任务书要求以外，我们发现3个与肝癌转移复发相关的标志物，包括CXCL5、异粘蛋白和MIF。其中，CXCL5通过对中性粒细胞的趋化作用在体内外促进肝癌细胞的生长和转移；异粘蛋白诱导肝癌细胞发生EMT；血浆MIF与肝癌发生、发展密切相关。上述研究结果均以第一作者发表在“Hepatology”（2012年）、“Clin Cancer Res”（2011年）和“Int J Cancer”（2011年）。迄今，以第一作者发表与本课题相关的论文9篇，其中，SCI收录5篇。申请国内专利3项，获得授权1项。