杆状病毒是许多重要农业害虫的病原物,是控制害虫种群密度的重要因子,同时杆状病毒作为外源基因表达载体也广泛应用于生命科学和医学研究中。但是,杆状病毒在宿主细胞增殖时,病毒毒力随着复制代数的增加而逐渐降低,这是因为子代病毒基因组基因组发生了变化。研究表明病毒毒力下降与其基因组中非同源序列区复制原点(non-hr ori)的拷贝数增加相关。申请人已构建了既对真核宿主细胞具有感染性,又可以象质粒一样在E.
杆状病毒作为生物杀虫剂和外源基因表达载体应用于生命科学的很多领域。本研究的目的是探讨杆状病毒在体内和体外复制时基因组变化的速度和模式。我们利用了一个构建的杆状病毒人工细菌染色体和两个亲缘关系较远的宿主,即粉纹夜蛾和草地贪夜蛾。AcBacph在离体(Tn-5B1-4 细胞系, Sf-9 细胞系)无稀释连续传代后,产生了各种突变体。提取子代病毒DNAs并转化至大肠杆菌。存在于单个菌落的bacmid DNA就构成一个病毒基因型。从每一个传达中的第1,5,10代中随机挑取100个单菌落并提取其中的bacmid DNA,共获得900个子代病毒基因型。用5种限制性内切酶进行了RFLP分析。结果表明当Acbacph在粉纹夜蛾的离体和活体传代时,子代病毒大都有各种突变体组成,而子代病毒平均基因组的长度、完整基因组比率相似。在离体和活体中,完整基因组的比率在第1代分别为6%和2%,在第5代上升至52%和87%,在第10代分别为82%和83%。然而,在Sf-9细胞系中的第1,5,10代的完整基因组的比率分别为3%, 2%和3%。本研究说明病毒在不同宿主中传代时具有不同的变化模式。