中文摘要：

动脉钙化是一种血管壁发生的类骨形成的主动调节过程，血管平滑肌细胞向成骨细胞表型分化是其重要病理基础。我们前期研究发现miR-135在血管平滑肌细胞向成骨细胞分化过程中表达显著降低，提示其参与调控动脉钙化。本研究首先分离培养具有钙化潜能的小鼠血管平滑肌细胞，通过调控miR-135水平来观察miR-135表达改变对血管平滑肌细胞向成骨细胞分化的影响，阐明miR-135在此过程中的作用。随后通过体内注射antagomirs特异性沉寂miR-135构建miR-135 缺失小鼠模型，动态观察miR-135缺失状态下血管平滑肌细胞表型变化及血管壁局部类骨形成过程。最后从多方面验证miR-135作用的靶基因，揭示其作用机制。探讨是否存在miR-135通过干扰血管平滑肌细胞向成骨细胞表型分化、抑制血管壁类骨形成，从而保护动脉钙化的新机制，为其防治开辟新思路。

结论摘要：

动脉钙化是一种血管壁发生的类骨形成的主动调节过程，血管平滑肌细胞向成骨细胞表型分化是其重要病理基础。我们前期研究发现miR-135在血管平滑肌细胞向成骨细胞分化过程中表达显著降低，提示其参与调控动脉钙化。本研究成功分离培养出具有钙化潜能的小鼠血管平滑肌细胞。在诱导平滑肌细胞向成骨细胞分化的过程中，将miR-135过表达后，ALP活性和OC分泌水平显著降低，而抑制miR-135表达后，二者表达显著升高。提示miR-135可以抑制平滑肌细胞向成骨细胞的分化。随后构建动脉硬化小鼠模型，通过体内注射antagomirs特异性沉寂miR-135的表达，结果显示与骨形成相关的指标，如ALP、OC分泌水平及I型胶原水平等较对照组明显升高。提示miR-135延缓或抑制动脉钙化进程。最后，使用萤光素酶报告基因载体证实runx2为miR-135作用的靶基因，在诱导血管平滑肌细胞向成骨细胞分化过程中过表达miR-135，结果发现runx2蛋白水平明显降低，而其mRNA水平无明显变化，说明miR-135在转录后水平调控runx2表达，进而抑制血管平滑肌细胞向成骨细胞分化。本研究证实miR-135通过作调节runx2表达来干扰血管平滑肌细胞向成骨细胞表型分化、抑制血管壁类骨形成，从而保护动脉钙化这一新机制，为其防治开辟了新的思路。