以菰NBS-LRR类抗病基因同源序列FZ14(GenBank登录号DQ239432)为模板设计特异性引物FZ14P1/P2 ,通过克隆池PCR法经分级筛选,从菰基因组TAC文库中获得1个阳性克隆(ZR1),序列分析比对证实该阳性克隆为含有菰抗病基因同源序列FZ14的抗病基因候选克隆。同时,ZR1具有植物NBS-LRR类型抗性基因中的P-loop (kinase 1a ),kinase 2,kinase 3a和GLPL(Gly-Leu-Pro-Leu)等保守基序,可能为抗性基因的部分序列。通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴,获得了48个独立转化子,其中36个T0植株对白叶枯病菌PXO71具有明显抗性;在T1代中,有7个株系对白叶枯病表现高抗性状,并分别成功收获了一定数量的T2代种子。结果表明,菰ZR1克隆至少含有1个白叶枯病抗性基因。本项目为新的抗病基因克隆及其抗性机理分析构建了理想的研究材料,同时也为抗病水稻新品种的培育提供了新思路。
英文主题词Zizania latifolia; transformation-competent artificial chromosome library; Oryza sativa; bacterial blight resistance; gene transfer