为研究白桦肉桂酰辅酶A还原酶( cinnamoyl-CoA reductase ,CCR) BpCCR基因的功能,本研究构建了BpCCR基因过表达和RNAi抑制表达载体并进行白桦转基因研究,经过PCR和Northern杂交验证,成功获得了3个过表达转基因株系,转基因株系CCR基因表达水平高于对照株系;为了克服稳定转基因耗时长,操作繁琐,成功率低的缺点,快速、经济和高效的鉴定白桦相关基因功能,本研究建立了农杆菌介导的白桦瞬时表达系统,成功在白桦中表达了GUS,GFP和BpCCR基因,RT-PCR检测表明,过表达株系与对照相比,CCR基因的表达水平明显升高,RNAi抑制表达株系的CCR转录本与对照相比降低,结果说明瞬时转化系统能够有效的在白桦中表达相关基因;为研究BpCCR基因的时空表达特性,为定向表达该基因奠定基础,本研究克隆了BpCCR基因1153bp的启动子序列,构建了启动子驱动GUS基因的pBpCCR-1301载体,利用瞬时转化技术转入白桦,GUS染色结果表明,该启动子在白桦组培苗的茎干,叶柄和叶脉处具有明显地表达活性。以上结果为进一步分析BpCCR的功能奠定了基础。
英文主题词Betula platyphylla Suks.; BpCCR; Promoter;Transgene.