中文摘要：

抗生素耐药是威胁公共安全的一个重大问题，生物天然免疫的重要分子- - 抗菌肽是一种极具潜力的新型抗菌药物。然而抗菌肽的耐药性问题、抗菌肽在生命体防御系统中准确定位等问题未能得到解决。国内外研究表明抗菌肽的产生与微生物的威胁存在着极强的相关性；同时抗菌肽的协同作用也暗示了"抗菌肽鸡尾酒疗法"的可行性。在我们之前的研究中也发现抗菌肽的联合作用对延缓微生物对抗菌肽的耐受有一定的作用。本项目将从自然环境和实验诱导两个方面对无指盘臭蛙皮肤分泌物抗菌肽表达谱与微生物关系进行研究，以期为解释抗菌肽生物多样性提供一定的证据，并为抗菌肽类药物的开发和应用提出新的思路，为进一步研究抗菌肽在生命体防御系统中的作用及应对抗菌肽的耐药性问题奠定基础。

结论摘要：

生物活性肽是机体防御系统的重要组成部分，而两栖动物皮肤是生物活性肽丰富的资源库。在同一物种不同个体中生物活性肽的组成差别仍不清楚。本研究中，于中国云南省昆明市和贵州省贵阳市收集黑斑蛙，以确定两个地区之间采集的个体在生物活性肽组成上是否存在差异。通过筛选cDNA文库鉴定了8种抗微生物肽和1种抗氧化肽。其中，三种抗菌肽（pelophylaxin2GY，temporin-1GY，temporin-1KM）和抗氧化肽antioxidin-PN是首次被报道。两个地区采集的个体在生物活性肽表达谱上具有明显差异nigrocin-1、nigrocin-2和pelophylaxin-2在两个地区采集的个体中均有表达；Pelophylaxin-2GY，temporin-1GY仅在贵阳采集的蛙中被发现，而antioxidin-PN、esculetin-1、esculetin-2和temporin-1KM仅在昆明采集的蛙中发现。之后利用RT-PCR法证实了这种差异。结果表明，不同栖息地采集的同一物种的生物活性肽具有明显的差别。抗菌肽的产生可能与模式识别受体识别微生物或微生物成分有关。本项目的进行表明多肽的表达与某个地理区域中的环境因素有关。刺激和调节两栖类生物活性肽产生的因素仍不清楚。我们利用电刺激使黑斑蛙排空分泌物，将其饲养于含有不同微生物的环境，电刺激收集分泌物，冷冻干燥保存后准备后续进行液相色谱-质谱联用分析。同时在3周后取皮肤提取RNA进行逆转录，分析表达谱。结果显示，nigrocin5家族抗菌肽在金黄色葡萄球菌刺激下表达增加，brevinin 2家族抗菌肽仅在大肠埃希菌刺激下表达；Nigrocin2家族抗菌肽在大肠埃希活菌刺激下表达明显增加而在灭活大肠埃希菌中表达量无显著变化。本项目研究过程中，从自然环境和实验诱导两个方面对两栖动物皮肤分泌物抗菌肽表达谱进行研究，为解释抗菌肽生物多样性提供一定的证据，并为抗菌肽类药物的开发和应用提出新的思路，为进一步研究抗菌肽在生命体防御系统中的作用及应对抗菌肽的耐药性问题奠定基础。在项目的支持下，取得了预期成果。共发表文章8篇，其中SCI文章4篇，核心期刊4篇；申报国家发明专利3项，已授权1项。