为了比较温肾阳、滋肾阴代表方右归丸(YGW)、六味地黄丸(LWDHW)补肾健脑在中枢胆碱能系统抗衰老作用机制及其异同,采用学习记忆行为学观察、脑片电刺激诱发其突触后电位和长时程突触增强记录、膜片钳法分析老年大鼠视皮质神经元电生理学改变;用YGW和LWDHW提取物灌饲,分析其对衰老过程中学习记忆行为学和电生理指标的影响;用胆碱能受体工具药,分析YGW和LWDHW对上述指标的影响的药理学机制;c-fos和胆碱酯酶组化分析视皮层神经元伴随衰老的胆碱能系统动态形态学特征、比较两方剂对胆碱能系统的形态学影响。生化测定SOD和线粒体含量。通过上述研究,获取在整体、组织、细胞、亚细胞和分子水平上两个方剂在中枢神经系统抗衰老的功能学、形态学作用的资料,揭示YGW温肾阳和LWDHW滋肾阴从宏观到微观抗衰老机理的神经生物学基础,为揭密中医补肾健脑实践中采用两种相反治则、抗衰老机制提供更先进的资料。
Warming Reinforcing Kidney Yan;Nourishing Kidney Yin;Anti-aging;Reinforcing the Kidney to Stre;Cholinergic System
目的和方法为了比较温肾阳、滋肾阴代表方右归丸(YGW)、六味地黄丸(LWDH)补肾健脑在中枢胆碱能系统抗衰老作用机制及其异同,采用学习记忆行为学观察、脑片电刺激诱发其突触后电位和长时程突触增强记录分析老年大鼠视皮质神经元电生理学改变;用YGW和LWDH提取物灌饲,分析其对衰老过程中学习记忆行为学和电生理指标的影响;用胆碱能受体工具药,分析YGW和LWDH对上述指标的影响的药理学机制;组织化学和胆碱酯酶组化分析视皮层神经元伴随衰老的胆碱能系统动态形态学特征、比较两方剂对胆碱能系统的形态学影响;电镜观察衰老和抗衰老处理后的微视改变;生化测定SOD和线粒体酶损伤和抗衰老处理的作用。通过上述研究,获取在整体、组织、细胞、亚细胞和分子水平上两个方剂在中枢神经系统抗衰老的功能学、形态学作用的资料,揭示YGW温肾阳和LWDH滋肾阴抗衰老机理的神经生物学机制的资料。结果发现 采用6个月龄大鼠的自然衰老大鼠和D-半乳糖衰老模型大鼠,观察其一般行为和水迷宫的学习记忆行为学,均可见动物普通行为如体重、体态、体貌、活动状况、饮食量等变化的增长和降低呈抛物线型变化;YGW和LWDH均可显著改善伴随衰老的一般行为学衰减,YGW对雌性衰老模型大鼠的行为学改变的纠正作用较强,而LWDH对雄性老年大鼠的一般行为学改善作用更好。Morris 水迷宫实验发现两个方剂对衰老大鼠学习记忆行为的改善作用有区别两方剂处理组的Morris水迷宫逃避潜伏期缩短,学习记忆能力改善,YGW对雄鼠的作用更强、LWDH对雌鼠作用更好。血液生化测定呈现抗衰老指标SOD活性和和衰老指标MDA在雄鼠和雌鼠的SOD值在经过YGW和LWDH处理后分别显著高于、低于各自的衰老模型组和空白对照组,两方剂均对雄鼠的作用略强;MDA值也有同向改善作用,YGW对雌鼠的作用略强。表明YGW和LWDH对衰老模型有明显的抗氧化、改善学习记忆能力作用,YGW仍对雌鼠作用略强、LWDH对雄鼠的作用更强。电镜观察微视组织发现两方剂对衰老大鼠脑皮质神经元有一定保护作用。脑片电生理研究表明用YGW和LWDH处理后,脑片上的兴奋性突触后电位平均值升高、长时程突触增强LTP的诱导成功率上升,雌性高于雄性,YGW的效果要略好于LWDHW。总体上看,两方剂均有抗衰老作用,YGW对雌性大鼠的作用略强,LWDH对雄性的作用更好。