分子信标(MB)是基于荧光能量转移原理设计的发夹型寡聚核酸荧光探针,已经成为分子生物学中强有力的研究工具。但细胞内核酸酶切会导致假阳性信号,并且MB自身背景荧光也会干扰检测灵敏度,现有的方法都不能同时解决上述问题。本申请首次提出将苯酚引入到MB荧光信号团的末端,将甲基紫晶(MV2+)引入到荧光淬灭团末端,八元瓜环(CB[8])与苯酚和MV2+的自组装可将MB荧光团和淬灭团在底部"锁紧",让彼此充分靠近,最大限度消除背景荧光,提高检测灵敏度。即使发生核酸酶降解,荧光团和淬灭团仍被CB[8]"锁定",不产生假阳性信号。MB与靶核酸作用后,在体系中加入等当量的2,6-二羟基萘(络合常数是苯酚的260倍)置换CB[8]中的苯酚客体,使其从CB[8]中脱出,荧光团远离淬灭团,发出荧光信号。该类染料与CB[8]自组装型MB既可避免核酸酶切导致的假阳性又可提高检测灵敏度,为MB性能优化提供新思路。
MB (molecular beacon);dye;CB[8];self-assembly;guest interchange
分子信标(MB)是基于荧光能量转移原理设计的发夹型寡聚核酸荧光探针,已经成为分子生物学中强有力的研究工具。但细胞内核酸酶切会导致假阳性信号,并且MB 自身背景荧光也会干扰检测灵敏度,现有的方法都不能同时解决上述问题。本申请首次提出将苯酚引入到MB荧光信号团的末端,将甲基紫晶(MV2+)引入到荧光淬灭团末端,八元瓜环(CB[8])与苯酚和MV2+的自组装可将MB 荧光团和淬灭团在底部“锁紧”,让彼此充分靠近,最大限度消除背景荧光,提高检测灵敏度。即使发生核酸酶降解,荧光团和淬灭团仍被CB[8]“锁定”,不产生假阳性信号。MB 与靶核酸作用后,在体系中加入等当量的2,6-二羟基萘(络合常数是苯酚的260 倍)置换CB[8]中的苯酚客体,使其从CB[8]中脱出,荧光团远离淬灭团,发出荧光信号。该类染料与CB[8]自组装型MB 既可避免核酸酶切导致的假阳性又可提高检测灵敏度,为MB 性能优化提供新思路。