采用Northern Blot、Western Blot、基因超表达和RNAi等方法,分析猪脂肪细胞分化的特征,PPARγ和TNFα对脂联素基因表达的诱导和抑制,脂联素基因表达的激素信号途径、遗传差异和生长期差异,以求证猪脂联素基因表达调控的分子基础、脂联素基因表达与脂肪细胞分化调控、脂联素基因表达的激素信号调控机理以及脂联素基因表达的遗传特征和时空规律。为动物脂肪沉积分子机理的进一步澄清提供理论
分离猪脂肪组织中前脂肪细胞,细胞原代培养,观察前脂肪细胞分化成成熟脂肪细胞的过程,分析脂联素、脂联素受体1,2,和PPARγ等基因表达差异。分析猪出生前后及性成熟前后脂肪细胞中脂联素基因转录和翻译水平的表达差异,探讨猪各生长期脂肪细胞分化的时空特点与脂联素基因表达的关系。构建PPARγ为目的基因的含核糖体进入位点的绿色荧光(pIRES-EGFP)真核表达载体(pIRES-EGFP-PPARγ,该载体可以分别表达目的蛋白和荧光蛋白,不影响PPARγ的活性),稳定转染3T3-L1前脂肪细胞或用TZD(PPARγ的外源配体,可激活PPARγ的表达)处理3T3-L1前脂肪细胞,分析脂联素基因的表达差异在完成上述计划工作的基础上,我们还做了如下相关研究工作系统地分离、克隆、测序分析和染色体定位了一批猪(梅山猪)功能基因;统地分析了这些功能基因在猪个组织器官中的基因表达谱;系统地研究了与脂联素功能重要相关的抗素基因的表达调控以及葡萄糖耐受和胰岛素抵抗。