异种血管内皮细胞可打破免疫耐受,诱导种与种之间抗血管交叉免疫反应,从而破坏肿瘤新生血管,抑制肿瘤生长,这一抗肿瘤过程可能有一些特定的分子、基因参与。为了研究哪些分子、基因在抗肿瘤新生血管交叉免疫反应中起重要作用,本研究直接以基因功能为靶向,拟采用异种免疫血清筛选cDNA表达文库技术(SEREX技术)、RNA干扰技术和动物转基因技术。用培养的小鼠内皮细胞免疫兔子获得免疫血清,利用异种免疫产生的抗血清筛选人脐静脉内皮细胞和人微血管内皮细胞cDNA表达文库,从而克隆异种同源的促新生血管生成相关的新基因,利用RNA干扰技术和转基因技术对新基因进行功能研究,同时探讨新基因在肿瘤新生血管生成、肿瘤发生、生长及转移过程中的作用,为肿瘤抗血管治疗提供实验基础和理论依据。
本课题利用免疫血清筛选cDNA表达文库技术(SEREX技术),用人脐静脉内皮细胞免疫产生的抗血清筛选人脐静脉内皮细胞和人微血管内皮细胞cDNA表达文库, 共获得了68个阳性克隆,对这些基因进行测序发现大约70%的阳性克隆分子与促进肿瘤新生血管生成及肿瘤侵润、转移有关,如Fibronectin1、Cyr61、PDGF、PAI-1、SIGIRR 、integrin 5、Type-II Transmembrane Protein p63基因等,这些分子将可为制备新型抗新生血管、抗肿瘤药物或免疫基因治疗的候选靶分子。另外,我们还筛选到了5个功能未知的基因,其中1个是全新的基因序列, 我们首次向GenBank递交了该基因序列(AY563006),该基因命名为PCIA1基因。另外我们还对PCIA1基因进行了初步功能研究,包括全基因克隆、表达谱研究、制备抗体、基因定位、细胞增殖与促进肿瘤生长等。我们已经圆满完成了该项目的研究内容,该项目在国内核心刊物共发表研究论文3篇,SCI收录的刊物(Biochemistry)待发表论文1篇,已经投出SCI论文1篇,向GenBank递交了5个新基因序列。