大麦黄矮病毒只能由麦蚜以持久性非增殖方式传播,麦蚜传毒与否及传毒效率的高低对黄矮病的发生和流行起着关键的作用。因此,对介体传毒分子机制的研究是世界上的研究热点之一。本项目在已获得编码介体麦二叉蚜50kD传毒相关蛋白候选基因的基础上,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,提纯产物制备抗血清,通过传毒试验确定对介体传毒的影响;利用获得的抗血清对麦蚜进行传毒蛋白的免疫胶体金定位,明确传毒相关基因的表达时空。采用分子生物学技术合成双链RNA,显微注射到蚜虫的血淋巴,利用dsRNA介导的基因沉默验证基因的功能,阐明该基因及其产物在BYDV与介体麦蚜相互识别中的作用,为探索利用自主知识产权基因进行抗介体传播病毒的基因工程奠定基础。
大麦黄矮病毒只能由麦蚜以持久性非增殖方式传播,麦蚜传毒与否及传毒效率的高低对黄矮病的发生和流行起着关键的作用。因此,对介体传毒分子机制的研究是世界上的研究热点之一。本项目在已获得编码介体麦二叉蚜50kD传毒相关蛋白候选基因的基础上,构建了原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,提纯产物制备抗血清,通过传毒试验确定了目标基因产物对介体传毒的影响;利用获得的抗血清对麦蚜进行传毒蛋白的免疫胶体金定位,明确传毒相关基因的表达时空。采用分子生物学技术合成双链RNA,显微注射到蚜虫的血淋巴,利用dsRNA介导的基因沉默验证了基因的功能,初步阐明了该基因及其产物在BYDV与介体麦蚜相互识别中的作用。与此同时,还进行了我国不同地区介体麦蚜传毒能力比较,发现大麦黄矮病毒PAV中国分离物PAV血清型的第三个新种,制备出了能够区分我国3种BYDV的地高辛探针,检测了不同地区BYDV变异动态。