中文摘要：

本课题拟采用RT-PCR、免疫组化、Western Blot、流式细胞术、反相高压液相色谱法、基因测序、质粒构建、基因转染、报告基因活性检测、MTT法、裸鼠生存期与瘤体体积检测、shRNAs技术等方法，系统研究遗传因素、药物环境因素在白血病CYP3A5耐药机制中的作用，了解药物对CYP3A5的转录调控及其可能涉及的信号转导途径，完善多药耐药谱的检测以及逆转耐药。若实现预期目标，将补充现有的耐药机制学说，并具有预测疗效及预后、指导合理用药、逆转耐药的临床应用价值。

结论摘要：

本课题应用PCR-RFLP、HPLC、免疫组化方法检测急性白血病患者CYP3A5基因型、酶活性以及骨髓活检病理标本CYP3A5蛋白的表达情况，结合临床资料，明确CYP3A5在AL患者中呈多态性表达，从而决定了其酶活性，并与耐药及不良预后相关，是化疗疗效和预后的独立预测指标。应用RT-PCR、Western Blot、HPLC方法检测化疗药物和其他常用的临床药物对CYP3A5转录、表达、活性的调控及其机制，成功建立CYP3A5体外模型，进一步全面检测CYP3A5耐药机制涉及的多药耐药谱,可指导临床合理用药。并建立用CYP3A5-报告基因质粒及核受体质粒共转染体系，加药干预后应用Dual-Luciferase Reporter assay system检测荧光素酶活力，证明调控机制中可能涉及PXR、RXR、GR等信号转导途径。构建siRNA干扰质粒转染HL-60/CYP3A50细胞特异性敲除CYP3A5基因，建立逆转CYP3A5基因的体外、体内（BALB/C裸鼠）模型的耐药表型，并通过RT-PCR、Western Blot、MTT及免疫组化等方法，确定其逆转的稳定、高效