中文摘要：

本项目拟用分子生物学方法，模拟骨源性干细胞自分泌及旁分泌的微环境，创造性地应用PTHrP-Ihh信号反馈轴及Sox9等骨源性细胞自稳定关键因子，提取RC、GC细胞中PTHrPmRNA经逆转录成cDNA，并重组为质粒，转染骨髓基质干细胞，诱导分化成骨。以期利用PTHrP、Sox9早期促成骨，晚期抑分化、防凋亡的生物学特性，制造出相对稳定的次分化状态细胞-骨骺干细胞，为更深刻的揭示骨源性干细胞分化规律

结论摘要：

研究背景骨骺干细胞（PSCs）是骨发生、发展的重要种子细胞，但目前尚无成熟的PSCs系稳定来源。研究目的构建PTHrP及SOX9的真核表达质粒，双基因共转染骨髓基质干细胞（MSCs），诱导其分化为稳定态PSCs，探讨MSCs及PSCs分化及稳定增殖规律。主要内容1.分离培养PSCs及MSCs；2.克隆PTHrP及SOX9并构建真核表达质粒；3.双基因分别以及共转染MSCs，诱导其分化为稳定态PSCs。重要成果成功克隆并构建pEGFP-N1/SOX9及pEGFP-N1/PTHrP全编码区复合质粒； pEGFP-N1/PTHrP复合质粒转染MSCs并诱导其分化为非稳态PSCs； PTHrP与SOX9重组真核表达质粒双基因共转染MSCs,并诱导MSCs分化为稳定态PSCs株方法的建立；稳定态PSCs株的筛选、扩大培养及鉴定。科学意义本项目创造性地应用PTHrP-Ihh信号反馈轴及Sox9等骨源性细胞自稳定关键因子转染骨源性干细胞诱导分化成骨，并在其分化过程中截获其次分化状态细胞PSCs亚系。首次从成年动物中分离出PSCs，既有明显的创新性，并为骨骺的再生与移植打下坚实的基础