(1)目的筛选白纹伊蚊应答登革病毒感染的差异基因,就其抗登革病毒的效应和参与免疫通道调节功能,进行鉴定研究,为阐明登革病毒与伊蚊相互作用的分子机制,寻找遗传操纵蚊虫抗病毒的效应分子,提供研究依据。(2)方法与内容①构建白蚊伊蚊cDNA文库和基因组文库,应用mRNA差异显示技术,分离白纹伊蚊感染登革病毒后诱导蚊表达的差异基因,用差异基因为探针,再从白蚊伊蚊cDNA文库和基因组文库中,杂交调出差异基因克隆,序列测定与分析。②应用RNA干扰技术、基因转染和转基因蚊技术,验证发现的差异基因抗登革病毒和参与调节抗菌肽转录的功能。③用登革病毒-2的结构蛋白PrM、E和非结构蛋白NS4B、NS3、NS5刺激差异基因表达,鉴定诱导差异基因表达的病毒分子。
登革病毒通过伊蚊传播给人类,引起登革热,登革出血热,危害严重。本研究是筛选白纹伊蚊应答登革病毒感染的差异基因,就其抗登革病毒的效应和参与免疫通道调节功能,进行研究。获得重要结果(1)克隆表达中华按蚊、白纹伊蚊抗登革病毒基因Defensin和 Cecropin ,并就其二基因结构与功能做了研究。(2)探索性研究转基因蚊所需蚊自身转座元件,并获得阶段成果。(3)完成登革病毒感染蚊模型建立,构建了登革病毒基因全长序列克隆及感染载体,成功将转座元件PiggyBAC转入白纹伊蚊,筛选出一株转基因的白纹伊蚊。上述研究工作,为进一步采用遗传操纵蚊虫,防治登革病毒等虫媒传染病,提供了重要实验依据。