中文摘要：

猪囊尾蚴病是由猪带绦虫的幼虫猪囊尾蚴引起的一种危害严重的人畜共患寄生虫病，我国是猪囊尾蚴病高发国家之一，用疫苗防治该病是当前研究热点。其中猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSOL18具有良好的免疫原性和免疫保护性, 是理想的疫苗候选抗原。本课题拟采用RT-PCR技术从猪带绦虫六钩蚴中扩增出45W-4B和TSOL18抗原编码基因，再通过基因拼接法(Gene SOEing)将两个单基因融合，构建TSO45W-4B-TSOL18融合基因，并将其克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体，电穿孔转化双歧杆菌（Bb），构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗，研究TSO45W-4B-TSOL18融合基因在重组Bb中的表达。然后将重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪，研究其诱导的免疫应答和对猪带绦虫卵攻击的保护力及其免疫机制，为猪囊尾蚴病的防治提供一种安全、高效的新型疫苗。

结论摘要：

本项目采用基因工程技术，选择人体正常菌群的双歧杆菌(Bb)为载体，构建猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗、重组Bb-TSOL18疫苗和重组Bb-TSO45W-4B -TSOL18疫苗，研究该疫苗的表达及稳定性。然后将该疫苗免疫仔猪，研究其诱导免疫应答的动态变化和对猪带绦虫卵攻击的保护力及其免疫机制。得到以下研究结果 1.成功构建了猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B疫苗、重组Bb-TSOL18疫苗和重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗，并实现了目的蛋白的体内外表达。 2.重组质粒转化菌pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum分别从人工传代培养第8代、第7代和第10代开始出现质粒丢失现象，可稳定遗传7代、6代和9代；在液氮中、-80℃、-20℃中比较稳定，而在普通的室温环境下，很快发生质粒丢失现象。 3.动态观察发现，猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后，血清IgG、IgG1和IgG2a水平分别在免疫后2～8周、2～8周、2～8周升高，分别在免疫后4周、6周、4周达较高水平；PBMC增殖水平在免疫后2～8周升高，6周达较高水平；PBMC中CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～8周和2～8周升高，分别在免疫后8周和6周达较高水平；PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平分别在免疫后2～6周、2～8周、4～6周和2～8周升高，分别在免疫后4周、6周、4周和8周达较高水平。提示猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗可诱导仔猪产生特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。其免疫应答水平，融合基因疫苗组优于单一基因疫苗组。 4.攻击试验发现，猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗可诱导仔猪获得83.09%的保护力，血清IgG和IgG2a水平升高，IgG1水平降低，PBMC增殖水平升高，PBMC培养上清液中IL-2和IFN-γ水平升高，IL-4和IL-10水平降低。提示猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗可诱导仔猪产生一定的保护力，Th1型免疫应答在其诱导的保护性免疫机制中起重要作用。其免疫保护效果，融合基因疫苗组优于单一基因疫苗组。