从各地奶牛水泻粪便中分离环孢子虫卵囊,采用PCR技术扩增rDNA间隔序列(ITS1、ITS2),对其进行PCR-RFLP和PCR-SSCP分析,确定所分离的环孢子虫种类与基因型。测定环孢子虫不同分离株的微卫星遗传指纹,将其与人的环孢子虫C. cayetanensis以及其他球虫进行比较分析,明确相互之间的遗传进化关系,确定其分子特性。利用试验所分离的各种环孢子虫地理株,接种各种试验动物,确定其易感
本研究对首次在奶牛粪便中发现的环孢子虫进行了形态学观察和分子特性的研究,并建立了以PCR为基础的分子检测方法。牛源环孢子虫卵囊,其大小、形状、孢子化以及抗酸染色等特征均与人的环孢子虫一致; 以ITS-1和18S rDNA遗传标记对其进行分子鉴定,结合形态学特征分析,可以确定牛源环孢子虫为艾美耳科环孢子虫属一新种。根据序列分析结果,建立了以KpnI为内切酶的PCR-RFLP方法,可以区别牛源环孢子虫与艾美耳球虫。首次将纯化的牛源环孢子虫卵囊经口感染免疫抑制的昆明系小鼠,初步建立了实验动物模型。根据牛源环孢子虫部分18S rDNA序列,设计种特异性引物Cyclo-SF3/Cyclo-SR4,与外套引物NesCycF/NesCycR结合,建立了牛源环孢子虫的套式PCR检测方法。并在牛源环孢子虫的高变区设计1条特异性寡核苷酸探针Cyc-Probe(5' 端用地高辛标记),建立了牛源环孢子虫的套式PCR-液相杂交-酶显色检测方法。此外,对我国奶牛中首次发现的贾第虫进行了种类与基因型鉴定以及分子检测的研究。上述研究为水源性寄生原虫的防控提供了重要资料。