我们收集了汕头大学医学院第一附属医院2005年1月~12月耐头孢他啶(MIC>32mg/L)或耐亚胺培南革兰阴性杆菌共165株,参照文献合成引物,以收集的165株细菌的总DNA为模板进行PCR扩增,选取含blaVIM-2的阳性菌株,对其所产VIM-2型金属β内酰胺酶的编码基因进行序列分析,明确酶基因表型;构建表达载体与VIM-2型金属β内酰胺酶编码基因的重组体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行原核表达;将已经成功表达的VIM-2型酶与GST的融合蛋白进行纯化后测定其等电点, 并测定其对多种β内酰胺类抗生素的稳定性和酶动力学参数,观察温度及pH等因素对酶活性的影响。
英文主题词VIM-2 metallo-β-lactamase;prokaryotic expression;purification;pI;kinetic parametes of β-lactams