通过激光扫描技术观察嫩西兰花中的葡萄糖异硫氰酸盐对癌细胞DNA形态及含量的影响。以人胃癌BGC-823细胞为体外试验模型,采用Northern印迹法、Western印迹法观察西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐对人胃癌细胞间的通讯的影响;对癌细胞基因的影响;对肿瘤细胞凋亡的影响。在分子水平揭示葡萄糖异硫氰酸盐抗癌机制,为今后进一步开发抗癌新药提供科学依据,符合国际上对药物绿色、环保、无毒的要求。从而也为更好地开发利用绿色蔬菜西兰花提供科学的理论依据。
本课题首先采用MTT法和SRB法对西兰花中提取获得的葡萄糖异硫氰酸盐(GS)和异硫氰酸盐(ITCS)进行体外筛选,并确定SGC-7901和HepG-2细胞为GS和ITCS的敏感瘤株。进一步运用流式细胞仪研究GS和ITCS诱导SGC-7901和HepG-2细胞凋亡作用、肿瘤细胞周期、细胞内活性氧含量变化和线粒体膜电位的影响;运用激光扫描共聚焦显微镜技术研究凋亡肿瘤细胞内Ca2+浓度的变化,阐明了GS和ITCS诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。此外,对西兰花中ITCS诱导SGC-7901细胞分化的机制进行了研究采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)方法考察ITCS对肿瘤细胞间通讯的影响;采用Northern和Western印记分析法研究了ITCS对SGC-7901细胞P21、C-myc、H-ras、K-ras基因表达的影响。本课题研究发现GS是通过恢复荷瘤机体抗氧化功能及诱导细胞凋亡等机制发挥抗肿瘤作用,而ITCS主要通过诱导肿瘤细胞凋亡及通过调节肿瘤细胞基因的表达诱导肿瘤细胞分化等机制发挥作用。本课题的研究阐明了西兰花抗肿瘤作用机理,更好地开发利用绿色蔬菜西兰花提供科学的理论依据。