提取BLZ和BLX两株膀胱癌细胞的mRNA,构建两株细胞的消减cDNA文库,并用膀胱癌细胞证实差异基因在不同侵袭程度膀胱癌中的表达特性;对差异基因进行测序,与DNA序列数据库作序列同源比较,在此基础上克隆膀胱癌侵袭相关新基因的全长cDNA,用生物信息学技术预测新基因功能;通过不同侵袭程度的膀胱癌组织标本检测和转基因技术确定膀胱癌侵袭相关基因的功能。采用SSH技术筛选出与膀胱癌的侵袭相关的新基因片段,进行结构预测和功能研究,对揭示膀胱癌侵袭的分子机制及基因诊断、预后预测、治疗方案的选择均具有重要的意义。
采用抑制性消减杂交的方法对我们自建的两株不同侵袭能力的人膀胱癌细胞进行分析,差异显示结果表明正向杂交库和反向杂交库的克隆测序结果进行生物信息学分析,共获得43个已知基因和39个新的EST,序列注册号为DR008207等;43个已知基因中,BLX高表达23个,BLZ高表达20个。获得差异表达基因主要有Keratin、Fibronectin、MMP19、NADH dehydrogenase、ATP synthase、Tumor-associated calcium signal transducer 2、Vimentin、UCHL1等基因。基因表达芯片分析与此相吻合。对于已知基因我们在细胞学和组织学的水平上进行验证,表明在细胞中验证了该方法的可信性,免疫组织化学分析显示侵袭能力强的细胞高表达基因在分化程度低的膀胱癌组织中高表达,与预期相符。对新的EST片断进一步全长克隆,验证绝大多数仍然是已知基因,只有个别是未知基因,其中一个可能与血管生成有关,其它基因需要进一步的验证。