此前,本实验室和美国Schimmel实验室各发现人色氨酸tRNA与合成酶(TrpRS)间的一个结合位点,本申请希望通过光化学交联技术研究并解决此二位点的结合,是随机事件,还是有序的两步结合问题。如为后者,则搞清楚它们的次序;为破解TrpRS氨酰化tRNATrp历程提供线索。三年间,我们完成了下述工作1.建立了蛋白质上定点导入光化学试剂,并使其与tRNA分子间进行光化学交联的技术;2.通过光化学交联研究,证明本实验室及美国Schimmel实验室完成的两个不同的tRNATrp-TrpRS复合物晶体结构在溶液构象中均存在;3.证明此二结构的形成过程中均为独立/随机完成的,没有先后次序;4.发现在合成酶TrpRS的N端β发夹结构中还有一个与tRNA结合的位点。一中氨酰tRNA合成酶有多达3个tRNA结合位点的现象,以前没有发现过。已发表了一篇文献综述(日本特邀),获上海市自然科学二等奖一次(第一获奖人)。此外,我们与加拿大Laval大学合作,初步证明了一种氨基酸类似物可以抑制枯草杆菌TrpRS的活性,而不影响人TrpRS的活性。有望发展出一类广谱的抗生物药物。
英文主题词TrpRS; tRNATrp; photoreactive reagent labeled cross-linking technique; binding site.