方法 ①应用原位杂交法和RT-PCR法观察甲状腺癌P53基因mRNA的表达。②运用免疫组织化学方法检测甲状腺癌P53基因蛋白的表达。③采用聚合酶链式反应—测序方法对甲状腺癌标本进行序列分析, 检测甲状腺癌P53基因外显子7,8,k-ras基因外显子1、2突变情况。④ 应用限制性内切酶HpaⅡ和MspⅠ酶切甲状腺癌及癌旁组织DNA,通过聚合酶链反应扩增P53基因第5外显子,经琼脂糖凝胶电泳后,分析其电泳图谱,探讨甲状腺癌P53基因甲基化状态。结果甲状腺肿瘤P53基因mRNA表达强于瘤旁组织,甲状腺癌组织P53基因mRNA及蛋白表达强于良性甲状腺瘤。14例甲状腺癌中有2例P5 3外显子7发生突变,有3例k-ras外显子2发生突变。 12例甲状腺癌中9例P53基因第5外显子出现高甲基化状态,而5例癌旁组织为低甲基化状态。结论甲状腺癌P53基因mRNA、P53蛋白超表达。甲状腺癌存在P53基因及k-ras基因的突变。P53基因高甲基化状态可能与P53基因突变有关。
英文主题词Genes; P53 gene; DNA methylation;gene expression