中文摘要：

肝细胞癌（HCC）是威胁人类健康的重大疾病,绝大多数患者无法手术。经动脉化疗栓塞（TACE）是不能手术切除肝癌的主要治疗手段，但栓塞难以彻底，容易复发转移，远期疗效不显著，传统放化疗无法解决这一介入难题，基因治疗成为该临床研究的前沿。正常肝细胞表达MAT1A基因，肝癌细胞表达MAT2A基因。我们前期研究表明肝癌Huh7细胞转染MAT1A后增殖减少、凋亡增加、肿瘤血管生成受抑。同时证实MAT2A短发夹RNA干扰遏制肝癌的生长和侵袭。但肝癌细胞转染MAT1A后MAT2A的表达没有下调，抑制MAT2A也未影响MAT1A的表达，单基因治疗未能完全控制肝癌的生长。对MAT1A和MAT2A的肝癌联合基因治疗是否具有更强的攻击力，在体疗效如何，尚不清楚。鉴此，本研究拟探讨经肝动脉导入MAT1A基因和MAT2A短发夹RNA协同抗肝癌的作用机制，并确定其量效关系和安全性，为肝癌基因治疗提供新的思路与策略。

结论摘要：

经动脉化疗栓塞术是不能手术切除肝细胞癌的主要治疗手段，但术后局部缺氧诱发的肿瘤促血管生成与转移始终是提高远期疗效的重大挑战，传统的辅助治疗方法收效甚微，基因治疗成为解决这一难题的潜在途径。MAT是一类催化S-腺苷甲硫胺酸合成的转移酶，其中MAT1A 在正常肝细胞中大量表达而低表达MAT2A，但在肝细胞癌中，MAT1A 的表达出现异常下调而MAT2A 的表达异常上调。理论上选择MAT1A或MAT2A作为肝癌治疗的靶点，具有组织特异性优势，有利于区分癌细胞和正常肝细胞，干扰癌变的根本环节和减少肝细胞损害。本课题组临床研究发现TACE 联合血管生成靶向药物抑制索拉非尼治疗方案能显著改善肝癌患者的预后，提示血管生成是提高TACE 疗效的一个重要干预靶点。继后本课题组成功构建了过表达和敲低MAT1A 和MAT2A的慢病毒载体以及MAT1A/MAT2A 相关的稳定表达肝癌细胞株。在深入探讨MAT1A/MAT2A 调节肝细胞癌发生发展的机制中发现MAT1A/MAT2A 的表达异常参与了肝癌的血管生成及侵袭转移过程，具体如下（1）在肝癌细胞中过表达MAT1A 并敲低MAT2A 的表达能明显抑制肝癌细胞的促血管生成能力以及体外侵袭和迁移能力。（2）OPN通路是MAT1A\MAT2A 调控肝癌血管生成及转移的关键信号通路。（3）通过建立病理特征和预后数据完善的肝癌标本库，我们发现OPN、integrinαvβ3 的阳性表达是肿瘤复发和转移及预后较差的预测因子，两者之间具有协同作用。（4）我们利用免疫组化的方法检测了82例HCC标本中MAT1A和MAT2A的表达水平，并分析其与HCC患者无瘤生存时间的关系。Kaplan-Meier 生存曲线分析显示低RMAT1A/MAT2A值组患者的无瘤生存时间明显短于高RMAT1A/MAT2A值组，提示MAT1A和MAT2A的表达比值可作为HCC预后判断指标，其表达失调与HCC复发密切相关。基于这些结果，我们揭示了肝癌细胞通过改变MAT1A/MAT2A 的表达促进肝癌的血管生成和复发的分子机制，而恢复MAT1A/MAT2A 的表达能有效抑制肝癌的血管生成和转移。本研究结果为肝癌的基因治疗提供了新的思路与策略。