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硫化修饰引物结合Pfu聚合酶的荧光定量PCR体系在Caveolin-1基因剪接多样性中的建立及应用
  • 项目名称:硫化修饰引物结合Pfu聚合酶的荧光定量PCR体系在Caveolin-1基因剪接多样性中的建立及应用
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30671047
  • 申请代码:C0701
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2007-01-01-2009-12-31
  • 项目负责人:杨慧龄
  • 负责人职称:教授
  • 依托单位:南华大学
  • 批准年度:2006
中文摘要:

完善硫化修饰引物结合 Pfu 校正聚合酶的高精度RT-PCR 方法,并应用在基因表达高通量筛选中;以及对结核病人缩短术前化疗时间手术模式评估体系中。通过免疫共沉淀法将含有 Caveolin-1 可变剪接形式相互作用蛋白沉淀,通过2D电泳切取蛋白点,通过质谱分析可能含有的候选相互作用蛋白,得到相关相互作用候选蛋白48个,对其中关键性信号转导蛋白进行功能分析,通过RNAi 诱导Caveolin-1 沉默,蛋白印迹法、免疫共沉淀法确定候选相互作用蛋白是否确实与Caveolin-1 相关及其作用机制。将含Caveolin-1 剪接异构体pLenti6/V5 慢病毒稳定或瞬间转染肝癌细胞株HepG2,MTT 法比较生长曲线,流式细胞检测细胞周期与凋亡率,裸鼠移植研究致瘤性。siRNA 干扰技术诱导基因沉默,不同化疗药物干预,探讨肝癌耐药逆转基因靶点。过表达caveolin-1能够促进白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖以及诱导细胞凋亡的作用,白藜芦醇作为雌激素样类似物(结构类似于雌激素己烯雌酚)不是由雌激素受体结合转运,而可能是由caveolin-1介导转运至胞内。

结论摘要:

英文主题词phosphorothioate primers;proofreading polymerase;caveolin-1; resveratrol


成果综合统计
成果类型
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  • 期刊论文
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