中文摘要：

恶性肿瘤的多药耐药是化疗失败的根本原因之一，目前尚无较好的解决方法。我们前期研究发现顺铂诱导耐药的肺癌细胞高表达IL-25，转染Fas基因可逆转耐药，并致IL-25表达显著下降。进一步的预实验发现干扰耐药肺癌细胞IL-25的表达后其对顺铂的耐药指数下降32.44%。上述现象说明肺癌细胞自分泌的IL-25及其介导的信号通路活化很可能在化疗耐药形成及逆转中发挥了重要作用。本研究以多药耐药肺癌细胞为研究对象，构建IL-25基因过表达及干扰载体，运用荧光定量PCR等分子生物学技术，在细胞及动物水平研究肺癌细胞自分泌IL-25与耐药指数间的内在联系，以及IL-25在肺癌化疗耐药与逆转中的作用及可能的信号转导机制。通过本项目的研究，将深入探讨IL-25在肺癌化疗多药耐药形成及逆转中的作用及调控机制，研究结果有望为肺癌化疗耐药的逆转提供新的干预靶点。

结论摘要：

一 项目背景肿瘤细胞对化疗药物的耐受性是化疗失败的根本原因之一。但关于细胞因子在耐药形成机制中的作用研究较少，本课题在前期研究的基础上，尝试探讨IL25在肺癌多药耐药形成及逆转中的作用及机制。二 主要研究内容与重要结果 1、 构建了开展IL25相关基因的工具1）在课题开始前期，首先成功构建了人源性IL25基因原核表达载体，并对其进行诱导表达、分化纯化，为后期大量使用IL25蛋白奠定了基础；2）其次，构建了IL25过表达腺病毒载体及慢病毒过表达载体，为后续建立过表达IL25的肿瘤细胞奠定了基础。3）与此同时，后期也克隆了IL25受体基因，并建立了慢病毒表达系统，为IL25直接杀灭肿瘤细胞、逆转耐药特性研究奠定了基础。 2、 初步阐明了IL25在肺癌细胞耐药形成及逆转中的作用1）以IL25刺激肺癌细胞，结果显示IL25能明显抑制肺癌细胞生长，但对耐药细胞的抑制效应较弱。2）在克隆IL25R并过表达于肺癌细胞的基础上，再以IL25刺激肺癌细胞，数据显示，IL25对肺癌细胞的生长抑制效应明显增强，尤其是对耐药肺癌的生长抑制效应显著增强。3）将过表达IL25的巨噬细胞与肺癌细胞共培养，肺癌细胞包括耐药肺癌细胞对多种耐药细胞的耐药指数明显下将。4）过表达IL25R肺癌耐药细胞与巨噬细胞共培养，对顺铂的耐药指数显著降低。 3、初步阐明了调控巨噬细胞IL25生成的信号转导机制实验首先克隆了人源性IL25启动子，并以此为模板，构建了不同长度的截短突变体并亚克隆至双荧光素酶报告载体中。将目的质粒以转入经PMA诱导的HL60细胞中，48h后测定启动子活性，数据显示，-1099～ +99区域是IL25启动子核心启动区；通过加入不同的信号通路抑制剂与激活剂后对IL25启动子活性检测数据显示，NK-KB，MAPK P38是调节IL25转录的主要信号通路，采用LPS刺激巨噬细胞，从RNA水平及蛋白水平对上述信号通路调节IL25表达的效应进行验证。与此同时，将巨噬细胞与肺癌细胞共培养后NF-KB活化明显受抑，IL25启动子活性显著下降，机制有待深入研究。三、项目科学意义本研究结果初步阐明了IL25对肺癌细胞生长特性的影响及其在肺癌耐药形成与逆转中的作用，研究结果一方面拓展了对细胞因子在肿瘤细胞耐药性形成机制的认识，另一方面也为肿瘤耐药逆转提供新的干预靶点。