中文摘要：

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是极难预防的家畜传染病之一。缺少安全、有效的疫苗是目前预防和控制PRRS发生与流行的主要障碍。本项目从当前生产急需出发，结合PRRSV分子生物学与分子免疫学的最新研究成果，以主要保护性抗原基因ORF5、ORF6作为目标基因，并对ORF5进行修饰，使其中和表位充分展示，利用ORF5与ORF6表达产物形成的异源二聚体（E/M）能促进E蛋白抗原肽与MHC复合物从内质网向高尔基体转运的特性，构建修饰的ORF5与ORF6双基因共表达的"自杀性"DNA疫苗，从诱导的抗体水平、IgG亚类、中和病毒能力、细胞免疫与攻毒后的临床症状、排毒情况等多方面综合评价免疫效果，以期获得一种更安全、高效、廉价的新型疫苗，控制PRRS的发生与流行，促进养猪业的健康发展。同时也为"自杀性"DNA疫苗这一新型疫苗设计在大动物中的免疫效果提供可参考数据，并为其它疫病新型疫苗研究提供新的思路和借鉴。

结论摘要：

猪繁殖与呼吸综合征是严重危害全球养猪业的重要传染病。本课题采用具有自主复制、高效表达特性的自杀性DNA疫苗策略发展新一代PRRS疫苗。通过对编码 GP5的ORF5基因进行修饰(GP5m)，发现在GP5的中和表位和诱骗表位中插入辅助序列后能显著增强中和抗体产生。进一步的研究还发现体外共表达的GP5和M蛋白能形成异源二聚体，异源二聚体形成能促进GP5从内质网向高尔基体转运、增强体液和细胞免疫。在上述研究基础上，构建了4种不同组合的自杀性DNA疫苗，免疫小鼠和猪发现共表达GP5m和M的自杀性DNA疫苗具有最好的免疫效果，显著缩短病毒血症持续时间。同时，还构建了分别表达GP5、GP5m、GP5/M、GP5m/M的四种以伪狂犬病毒为载体的疫苗，也发现表达GP5m/M的载体疫苗效果最好。比较共表达GP5m和M的自杀性DNA疫苗和载体疫苗对猪的免疫保护，发现这两种疫苗均显著优于灭活疫苗。相比较，自杀性DNA疫苗诱导更强的中和抗体和细胞免疫，是一种具有应用前景的新型候选疫苗。本课题在Vaccine、Virus genes等期刊发表研究论文17篇，申请发明专利3项（授权1项），获转基因安全评价证书1项。